ETD

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• Botrytis cinerea
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• Lactuca sativa
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• RNAi
• Spray Induced Gene Silencing

La tecnica SIGS (Spray Induced Gene Silencing) è un approccio innovativo basato sull’applicazione di dsRNA sulle piante per il silenziamento selettivo dell’espressione di geni dei patogeni delle piante. L’obiettivo del lavoro è stato valutare l’efficacia di dsRNA prodotto in vivo da un ceppo di Escherichia coli trasformato con una porzione del gene BcBmp3, nel contenimento dell’infezione di Botrytis cinerea su piante di lattuga.
Il sistema L4440-HT115(DE3) è stato indotto con IPTG alla produzione di BcBmp3- e GFP-dsRNA. Dopo estrazione degli acidi nucleici i dsRNA sono stati purificati mediante estrazione su fase solida (SPE) e analizzati mediante elettroforesi e analisi spettrofotometriche. Le piante di lattuga sono state trattate con i dsRNA mediante irrorazione fogliare a pressione, uno o due giorni prima dell’inoculo con una sospensione conidica di B. cinerea. La severità della malattia è stata valutata mediante una scala patometrica e i dati sono stati analizzati mediante ANOVA e test HSD di Tukey.
I trattamenti con dsRNA di BcBmp3 hanno determinato una significativa riduzione della malattia rispetto ai controlli (acqua e dsRNA di GFP). Le applicazioni effettuate un giorno e due giorni prima dell’inoculo con il patogeno hanno raggiunto rispettivamente un’efficacia del 50% e del 33,5%. I risultati indicano che il dsRNA di BcBmp3 è in grado di limitare l’infezione del patogeno, pur richiedendo ulteriori studi di ottimizzazione per aumentarne l’efficacia applicativa.