Tesi etd-11202025-154856 |
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Tipo di tesi
Tesi di laurea magistrale
Autore
ANGELI, TERESA
URN
etd-11202025-154856
Titolo
Silenziamento di geni endogeni in lattuga: valutazione di diverse modalità di applicazione di dsRNA esogeno prodotto in vivo
Dipartimento
SCIENZE AGRARIE, ALIMENTARI E AGRO-AMBIENTALI
Corso di studi
BIOTECNOLOGIE VEGETALI E MICROBICHE
Relatori
relatore Dott.ssa Pecchia, Susanna
relatore Prof. Pugliesi, Claudio
correlatore Prof.ssa Trivellini, Alice
relatore Prof. Pugliesi, Claudio
correlatore Prof.ssa Trivellini, Alice
Parole chiave
- ChlH
- dsRNA
- GUN4
- infiltrazione fogliare
- Lactuca sativa
- LDH nanosheet
- nanoparticelle LDH
- PDS
- RNAi
- seed soaking
- seedling soaking
- siRNA
Data inizio appello
09/12/2025
Consultabilità
Non consultabile
Data di rilascio
09/12/2028
Riassunto
L’applicazione esogena di RNA a doppio filamento (dsRNA) per attivare eventi di interferenza a RNA (RNAi) in un organismo ha ormai trovato una ampia applicazione in diversi settori della biologia. Quando il bersaglio del silenziamento è però un gene endogeno di specie vegetali non modello, l’obbiettivo è più complesso. A tale proposito, l’obiettivo di questa tesi è stato sperimentare l’uso di dsRNA in lattuga per indurre il silenziamento di geni endogeni reporter, adottando diverse metodologie di applicazione.
Il dsRNA diretto contro i geni LsGUN4, LsChlH, LsPDS è stato prodotto in vivo utilizzando cellule trasformate di E. coli HT115 (DE3) ed estratto e purificato su fase solida (SPE). Sono stati testati tre metodi di applicazione esogena: seed soaking, seedling soaking e infiltrazione fogliare, sia con dsRNA libero che complessato con nanoparticelle Layered Double Hydroxide (LDH). L’efficacia del trattamento è stata valutata tramite analisi fenotipiche, spettrofotometriche e molecolari.
Nelle prove di seed e seedling soaking non sono emerse differenze significative con i controlli, salvo una lieve riduzione di aree fogliari e peso secco nei semenzali trattati con LsGUN4. L’infiltrazione fogliare non ha determinato variazioni significative di espressione, ma in alcune piante infiltrate con LsPDS-dsRNA+LDH sono comparse aree clorotiche localizzate. I risultati indicano che il silenziamento esogeno in lattuga è ancora limitato da problemi di assorbimento e stabilità del dsRNA.
Il dsRNA diretto contro i geni LsGUN4, LsChlH, LsPDS è stato prodotto in vivo utilizzando cellule trasformate di E. coli HT115 (DE3) ed estratto e purificato su fase solida (SPE). Sono stati testati tre metodi di applicazione esogena: seed soaking, seedling soaking e infiltrazione fogliare, sia con dsRNA libero che complessato con nanoparticelle Layered Double Hydroxide (LDH). L’efficacia del trattamento è stata valutata tramite analisi fenotipiche, spettrofotometriche e molecolari.
Nelle prove di seed e seedling soaking non sono emerse differenze significative con i controlli, salvo una lieve riduzione di aree fogliari e peso secco nei semenzali trattati con LsGUN4. L’infiltrazione fogliare non ha determinato variazioni significative di espressione, ma in alcune piante infiltrate con LsPDS-dsRNA+LDH sono comparse aree clorotiche localizzate. I risultati indicano che il silenziamento esogeno in lattuga è ancora limitato da problemi di assorbimento e stabilità del dsRNA.
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