• cellule
• centrifugazione in gradiente di saccarosio
• H28
• HeLa
• isolamento
• mesotelioma pleurico maligno
• mitocondri
• progetto proteoma umano
• purificazione
• standardizzazione
• strokes
• Western Blot

Lo scopo della tesi è quello di purificare i mitocondri dalle cellule H 28 di mesotelioma pleurico maligno. Abbiamo testato il protocollo Pieroni, ossia la centrifugazione in gradiente di saccarosio, in cui le cellule vengono rotte meccanicamente tramite strokes e sonicate con la tecnica ad immersione. Tramite una serie di centrifughe tra cui quella sul gradiente , otterremo un anello di mitocondri all'interfaccia del gradiente. Anche sulle cellule HeLa è stato testato un protocollo d'isolamento per la frazione mitocondriale, tramite l'uso di detergenti di lisi cellulare. Tali protocolli sono stati seguiti da una corsa elettroforetica per l'adesione delle proteine mitocondriali sul gel di poliacrilammide al 12% ed in seguito dal trasferimento di tali proteine su membrana in PVDF. Al termine del blot, tramite lo strumento di lettura con chemioluminescienza abbiamo ottenuto le immagini riferenti la frazione mitocondriale purificata dalle cellule H28 ed HeLa.