• catalisi enzimatica
• immobilizzazione enzimi
• inibitori
• MAO

La monoammino ossidasi (MAO) è un enzima localizzato nella membrana mitocondriale esterna e distribuito in vari tessuti. La MAO catalizza la deamminazione ossidativa di ammine primarie, secondarie e terziarie; in questo processo enzimatico, la porzione amminica viene ossidata a immina, che successivamente viene idrolizzata per dare un’aldeide. Nei mammiferi esistono due forme della MAO, la MAO-A e la MAO-B, che differiscono nella specificità e sensibilità verso substrati e inibitori diversi. Inibitori selettivi della MAO-A sono ad esempio usati nel trattamento della depressione e dell’ansia, mentre gli inibitori della MAO-B vengono somministrati nella cura del Parkinson e dell’Alzheimer.
L’importanza da un punto di vista farmacologico e terapeutico della ricerca di composti che agiscano come inibitori della MAO richiede lo sviluppo di metodi efficaci per studiare l’attività enzimatica e l’inibizione e per identificare rapidamente questi composti in miscele complesse.
Un approccio promettente è rappresentato dalla possibilità di immobilizzare l’enzima su un supporto cromatografico per creare un bioreattore (IMER, Immobilized Enzyme Reactor). La tecnica di immobilizzazione degli enzimi è nota già da diversi anni ed ha permesso l’utilizzo dei biocatalizzatori sia in processi industriali che in campo medico. Questa tecnica infatti pemette di superare alcuni svantaggi legati all’uso di enzimi quali la scarsa stabilità, la difficoltà di recupero dalla miscela di reazione ed il costo elevato.
Nel presente lavoro di tesi sarà studiata l’immobilizzazione mediante legame non covalente dell’enzima MAO-A proveniente da fonti commerciali su una fase stazionaria cromatografica. Il supporto così ottenuto sarà utilizzato come IMER per lo studio della cinetica enzimatica e per la determinazione quantitativa dei parametri cinetici. Sarà valutata anche la possibilità di studiare direttamente on-line fenomeni di inibizione dell’enzima in presenza di composti di varia struttura.