ETD

• Agrobacterium tumefaciens
• Crispr/Cas9
• genome editing
• Triticum aestivum

Il frumento tenero (Triticum aestivum L.) è una delle colture più diffuse al mondo, utilizzata principalmente per la produzione di alimenti. Data la sua importanza, studi sull’applicazione di nuove tecniche di miglioramento genetico, come CRISPR/Cas9, sono fondamentali per lo sviluppo di strategia per incrementarne la produttività e la resistenza agli stress biotici e abiotici. In questa tesi, il primo obiettivo è stato sviluppare e valutare una piattaforma di rigenerazione e trasformazione mediata da Agrobacterium di T. aestivum cv. Chinese Spring . A tale scopo, embrioni immaturi sono stati trasformati, seguendo un protocollo di coltura in vitro, confrontando due plasmidi privi di RNA guida: uno contenente la sola Cas9 e uno contenente Cas9 associata al regolatore morfogenico GR-GRF4–GIF1. Il secondo obiettivo ha previsto la modifica dei due plasmidi mediante l’inserimento di quattro guide sgRNA dirette contro il gene CBFIVd-B22b. Questo gene, localizzato nella regione Fr-B2 associata alla tolleranza al gelo, rappresenta un potenziale candidato per lo studio della risposta del frumento tenero alle basse temperature. L’analisi mediante PCR ha identificato quattro piante positive al T-DNA, due per ciascun trattamento. Nelle condizioni sperimentali adottate, i due costrutti hanno mostrato efficienze comparabili di trasformazione e rigenerazione. Parallelamente, le quattro sgRNA sono state correttamente assemblate nei due costrutti. Il lavoro fornisce quindi un'importante base sperimentale per lo sviluppo di future applicazioni di genome editing nel frumento tenero e mette a disposizione costrutti utilizzabili per futuri esperimenti di editing e per la caratterizzazione funzionale del gene CBFIVd-B22b.