ETD

• Escherichia coli
• mastite
• miscele
• oli essenziali
• sinergia
• Staphylococcus aureus

This study aims to evaluate the antimicrobial activity of selected essential oils against the most common etiological agents of bovine mastitis, with particular emphasis on Staphylococcus aureus and Escherichia coli, while also addressing the issue of antibiotic resistance in dairy cattle production.
he experimental study began with the collection of milk samples from cows affected by mastitis or presenting a high somatic cell count, along with data collection from dairy farms located in the provinces of Mantua (MN) and Cremona (CR). The samples were stored frozen until culture inoculation.
For Staphylococcus aureus, the protocol included a pre-enrichment step, two passages on selective solid culture media, and a coagulase test to confirm the presence of coagulase-positive staphylococci. In contrast, for Escherichia coli, a pre-enrichment step followed by inoculation on selective media was performed.
Subsequently, the presemptive S. aureus isolates were confirmed by PCR (Polimerase Chain Reaction) analysis The second experimental phase consisted of several steps, including revitalization of the isolated strains in liquid culture media, determination of the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC), and final interpretation of the results. The essential oils tested were sage (Salvia sclarea L.), oregano (Origanum vulgare L.), lavender (Lavandula angustifolia Mill.), laurel (Laurus nobilis L.) and juniper (Juniperus communis L.).
The results obtained in this study are encouraging. The tested essential oils exhibited significant in vitro antibacterial activity, both when evaluated individually and in combination. Among the tested oils, oregano showed the strogest antibacterial effect, remaining active up to 1:256 (v/v) diluition, as confirmed by both the minumum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) assays. This was followed, in descreasing order of antibacterial activity, by bay laurel, lavender, sage and juniper.
Based on the MIC and MBC results, several essential oils blends were formulated and evaluated using different proportions selected according to both the experimental findings and the available literature. Among the tested combinations, the mivture containing 30% lavender, 40% juniper, and 30% oregano exhibited the highgest inhibitory and bactericidal activity, remaining effective up to a 1:1024 (v/v) diluition.
Although these findings highlight the promising antibacterial potential of the tested essential oil and their combinations, further investigations are required. In particular, citotoxicity studies and in vivo trials will be necessary to assess their safety, tolerability and therapeutic efficacy before considering their potential application in the clinical management of bovine mastitis.

Lo studio ha come scopo quello di mettere in evidenza gli effetti antimicrobici di alcuni oli essenziali nei confronti dei più comuni agenti di mastite bovina, in particolar modo Staphylococcus aureus ed Escherichia coli, portando alla luce anche il problema dell’antibiotico-resistenza all’interno dell’allevamento bovino da latte.
La sperimentazione è partita con la raccolta di campioni di latte mastitico o con un numero di cellule somatiche elevato e raccolta dati presso allevamenti nella provincia di Mantova (MN) e Cremona (CR). I campioni sono stati conservati congelati sino al momento della semina in coltura.
Per quanto riguarda S. aureus, il protocollo prevedeva un pre-arricchimento, due passaggi in terreno di coltura solido selettivo e prova della coagulasi per conferma di stafilococchi coagulasi positivi. Invece, per quanto riguarda E. coli, si è proceduto ad un pre-arricchimento e ad una semina su terreno selettivo.
In seguito, si è proceduto alla conferma molecolare dei ceppi sospetti S. aureus mediante PCR (Polimerase Chain Reaction).
La seconda fase sperimentale si è suddivisa in varie parti ovvero rivitalizzazione dei ceppi isolati in terreno liquido, esecuzione della MIC (concentrazione minima inibente) e MBC (minima concentrazione battericida) ed infine lettura dei risultati. Gli oli essenziali che sono stati testati sono salvia (Salvia sclarea L.), origano (Origanum vulgare L.), lavanda (Lavandula angustifolia Mill.), alloro (Laurus nobilis L.) e ginepro (Juniperus communis L.).
I risultati sono incoraggianti, in vitro è stato possibile portare alla luce l’attività antibatterica degli oli essenziali testati, sia in singolo che in miscela. L’origano presenta la maggior attività antibatterica (sino alla diluizione 1:256), confermato dai risultati di MIC ed MBC, a seguire abbiamo alloro, lavanda, salvia e ginepro.
Sulla base degli esiti derivanti dalle MIC ed MBC, sono state proposte e testate diverse miscele di oli, associati in proporzioni differenti sulla base dei risultati ottenuti e dei dati presenti in letteratura. Anche in questo caso i risultati sono stati promettenti: la miscela che presentava una maggior attività inibente e battericida era lavanda 30%-ginepro 40%-origano 30% con attività presente sino alla diluizione 1:1024 vol/vol.
Dovranno poi seguire delle prove di tossicità ed in vivo per testare l’effettiva efficacia e sicurezza di questi oli essenziali nella pratica clinica per la gestione e il controllo della mastite bovina.