• anti-biofilm
• gp158
• Phage Zeno

La crescente diffusione di ceppi antibiotico-resistenti, in particolare MRSA, rende urgente lo sviluppo di alternative terapeutiche. In questo studio è stato valutato il fago litico Zeno contro biofilm di S. aureus, con due obiettivi principali: migliorare l’attività antibiofilm mediante phage training ed esplorare la funzione della proteina gp158, con potenziale attività depolimerasica. Dopo 30 round evolutivi (R30) su biofilm, sono stati isolati 10 mutanti dal fago R30 e confrontati con WT (wild-type) e R8 (mutante planktonico), valutandone l'attività prima in planktonico e poi sul biofilm. R30 non ha mostrato un' attività significativa, mentre il mutante P6 ha evidenziato un’elevata attività litica in planktonico,ma senza migliorare l’efficacia sul biofilm. L’analisi genomica ha rilevato mutazioni biofilm-specifiche in geni strutturali, condivise da pochi mutanti. In parallelo, gp158 è stata clonata, espressa e purificata in E. coli, mostrando caratteristiche compatibili con "receptor-binding proteins" (RBPs) ma senza attività depolimerasica rilevabile. I dati suggeriscono la presenza di limiti del phage training adottato sul biofilm e offrono basi per futuri studi sugli enzimi fagici, indagando più affondo sulla loro funzione e valutando strategie combinate.

The increasing spread of antibiotic-resistant strains, particularly MRSA, highlights the urgent need for alternative therapies. In this study, the lytic phage Zeno was evaluated against S. aureus biofilms, with two main objectives: to enhance antibiofilm activity through phage training and to investigate the function of the gp158 protein, predicted to act as a depolymerase. After 30 evolutionary rounds (R30) on biofilms, ten mutants were isolated from the R30 population and compared with WT (wild-type) and R8 (planktonic-trained mutant), assessing their activity under planktonic and biofilm conditions. R30 did not show significant improvement, while mutant P6 displayed strong lytic activity in planktonic cultures but no superior antibiofilm effect. Genomic analysis revealed biofilm-specific mutations in structural genes, shared by only a few mutants. In parallel, gp158 was cloned, expressed and purified in E. coli, showing structural features consistent with receptor-binding proteins (RBPs) but lacking detectable depolymerase activity. These findings underline the limitations of biofilm-based phage training and provide a basis for future studies on phage-derived enzymes, aimed at clarifying their function and developing combined therapeutic strategies.