Tesi etd-07222026-200533 |
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Tipo di tesi
Tesi di laurea magistrale
Autore
DEVALI, SARA
URN
etd-07222026-200533
Titolo
Applicazione del genome editing tramite CRISPR/Cas9 per il silenziamento genico di ROX in Lactuca sativa L.
Dipartimento
SCIENZE AGRARIE, ALIMENTARI E AGRO-AMBIENTALI
Corso di studi
BIOTECNOLOGIE VEGETALI E MICROBICHE
Relatori
.
relatore Pugliesi, Claudio
relatore Vangelisti, Alberto
relatore Vangelisti, Alberto
Parole chiave
- CRISPR/Cas9
- Lactuca sativa L.
- ROX
Data inizio appello
05/10/2026
Consultabilità
Non consultabile
Data di rilascio
05/10/2029
Riassunto (Inglese)
Riassunto (Italiano)
Questo lavoro sperimentale ha come obiettivo il knockout del gene ROX in L. sativa attraverso l’applicazione del genome editing con il sistema CRISPR/Cas9, ponendo le basi per lo studio del suo ruolo nell’organogenesi fiorale e vegetativa.
Sono stati clonati due gRNA diversi in parallelo nel plasmide pKSE401 attraverso la tecnica del Golden Gate. I costrutti ricombinanti sono stati inseriti in cellule competenti di E. coli attraverso shock termico e validati mediante estrazione plasmidica e digestione enzimatica. Successivamente sono stati inseriti in cellule di Agrobacterium tumefaciens attraverso elettroporazione. Dopo aver verificato l’avvenuta trasformazione dei ceppi selezionati per l’infezione, gli espianti cotiledonari di Lactuca sativa sono stati co-coltivati con l’inoculo batterico. I tessuti infettati sono stati sottoposti a rigenerazione in vitro su terreni di coltura selettivi per isolare le linee vegetali trasformate.
Il DNA genomico estratto dalle plantule rigenerate è stato utilizzato per l’amplificazione del gene target ROX, seguita da sequenziamento Sanger e analisi bioinformatica dei ferogrammi per identificare le piante editate.
Sono stati clonati due gRNA diversi in parallelo nel plasmide pKSE401 attraverso la tecnica del Golden Gate. I costrutti ricombinanti sono stati inseriti in cellule competenti di E. coli attraverso shock termico e validati mediante estrazione plasmidica e digestione enzimatica. Successivamente sono stati inseriti in cellule di Agrobacterium tumefaciens attraverso elettroporazione. Dopo aver verificato l’avvenuta trasformazione dei ceppi selezionati per l’infezione, gli espianti cotiledonari di Lactuca sativa sono stati co-coltivati con l’inoculo batterico. I tessuti infettati sono stati sottoposti a rigenerazione in vitro su terreni di coltura selettivi per isolare le linee vegetali trasformate.
Il DNA genomico estratto dalle plantule rigenerate è stato utilizzato per l’amplificazione del gene target ROX, seguita da sequenziamento Sanger e analisi bioinformatica dei ferogrammi per identificare le piante editate.
File
| Nome file | Dimensione |
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La tesi non è consultabile. |
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