• mieloma multiplo
• NRAS
• overespressione
• siRNA

NRAS fa parte della famiglia di proteine RAS, delle piccole GTPasi che permettono la trasduzione del segnale all’interno della cellula. È proteina monomerica che può avere due conformazioni, una legata a GDP “inattiva” e una legata a GTP “attiva”. Nel mieloma multiplo le mutazioni di NRAS più frequenti cadono a livello del codone 61: Q61R e Q61K. Il mieloma multiplo è una neoplasia caratterizzata dalla presenza di plasmacellule anomale nel midollo osseo che, proliferando in modo incontrollato, portano alla produzione eccessiva di anticorpi. Lo scopo della tesi è quello di investigare il ruolo biologico di NRAS mutato nelle linee cellulari di mieloma multiplo. Sono state utilizzate linee di mieloma multiplo wild type per NRAS (OPM2) manipolate geneticamente al fine di over-esprimere in modo inducibile la proteina NRAS Q61R e la wild type. Le OPM2 sono state infettate con un vettore lentivirale contenente la sequenza mutata del gene, regolato dal sistema di induzione con doxiciclina reverse-tTA (Tet-On). Le tecniche utilizzate sono la Real-time PCR, il Western blot e la citofluorimetria. Inoltre, è stata effettuata l'analisi del ciclo cellulare. Inoltre, per testare la specificità di un pannello di siRNA disegnati contro NRAS mutato (Q61R e Q61K), è stato utilizzato un sistema reporter basato sulla Luciferasi nelle cellule HEK293T. I dati sono stati poi analizzati per valutare la differenza tra l’azione del siRNA sull’mRNA contenente la sequenza target e l’azione sull’mRNA wild type.