• CRISPR/Cas9
• mieloma multiplo
• modifica genomica
• NRAS

Il mieloma multiplo (MM) è una neoplasia clonale delle cellule B caratterizzata da un'espansione anomala delle plasmacellule nel midollo osseo e in siti extramidollari.
A livello genetico il MM è principalmente caratterizzato da traslocazioni che coinvolgono il cromosoma 14 e da mutazioni a singolo nucleotide. Quest’ultime mutazioni spesso interessano geni appartenenti al pathway mitogen-activated protein kinase (MAPK), come KRAS, NRAS e, meno comunemente, BRAF.
La maggior parte delle mutazioni oncogeniche nei geni RAS sono mutazioni missenso di tipo guadagno di funzione e le mutazioni più frequenti di NRAS e KRAS sono a livello dei codoni 12 (G), 13 (G) e 61 (Q), e causano l'attivazione costitutiva delle proteine stesse.
Nonostante l'ampia ricerca condotta sul ruolo tali geni e mutazioni in altri tipi di tumori, nel contesto del MM esiste una carenza di dati sperimentali che descrivano il loro preciso coinvolgimento a livello cellulare. Pertanto, ad oggi resta essenziale studiare il ruolo delle proteine RAS nel MM. Numerosi studi di associazione hanno evidenziato un legame significativo tra queste mutazioni e la progressione tumorale, la ricorrenza della malattia e l'insorgenza di resistenza ai trattamenti farmacologici. Quindi, ridurre l'espressione dei geni RAS mutati nel MM potrebbe essere una strategia utile per rallentare o inibire la progressione della malattia.

Durante il periodo di internato di tesi, mi sono concentrata sullo studio del ruolo della mutazione NRAS 182A>G (Q61R) nel MM e ho esplorato la possibilità di bersagliare questa mutazione.
Il mio approccio sperimentale ha coinvolto l'utilizzo di linee cellulari in vitro di MM, come ad esempio la linea ARK, e di melanoma, come la linea A375.
Nello specifico, ho adottato la strategia di gene editing per eliminare in modo mirato l'allele mutato di NRAS (182A>G). Questa strategia è stata realizzata utilizzando varianti mutanti di Cas9, come Cas9 EQR e Cas9 VQR.
La mia ricerca ha compreso una serie di esperimenti mirati a valutare l'efficacia delle guide RNA (gRNA) impiegate nel gene editing. Successivamente, ho valutato l'efficienza dell'editing genetico e ho analizzato gli effetti della modifica genetica sul comportamento di queste linee cellulari.
Questo lavoro sperimentale ha contribuito a fornire una panoramica più chiara sull'efficacia delle strategie di gene editing nel contesto delle mutazioni genetiche associate al MM.