• fotorecettori
• microglia

Le cellule della microglia rappresentano i principali mediatori responsabili della difesa immunitaria all’interno del sistema nervoso centrale. Queste cellule intervengono in molti processi fisiologici e garantiscono il trofismo neuronale mantenendo l’omeostasi cerebrale.
Storicamente si riconoscono due fenotipi di microglia attivata, definiti M1 ed M2 (rispettivamente fenotipo pro- e anti-infiammatorio), esiste, in realtà, una più complessa ed eterogenea distribuzione fenotipica della microglia che consiste in un gradiente di stati di attivazione che si collocano tra questi due estremi.
Studi recenti hanno evidenziato il contributo della microglia in varie malattie neurodegenerative incluse quelle retiniche, non solo come conseguenza della malattia, ma anche nella stessa eziogenesi.
Questo progetto di tesi ha come scopo la valutazione dei composti, noti per il loro coinvolgimento in importanti pathways metabolici, di valutare la loro capacità di riprogrammare il metabolismo microgliale e di inibire l’attivazione pro-infiammatoria della microglia.
A tale scopo, è stata testata la capacità di questi composti di contrastare, in vitro, la polarizzazione pro-infiammatoria della microglia indotta del lipopolisaccaride. La sperimentazione è stata condotta impiegando la linea stabile BV2 murina e la microglia murina primaria.
La valutazione dei vari composti è stata effettuata saggiando l’espressione genica e livelli proteici dei marcatori tipici dei due stati di attivazione mediante, rispettivamente RT-qPCR, microscopia a fluorescenza e Western Blot. Infine, il potenziale neuroprotettivo delle sostanze selezionate è stato poi testato in vitro utilizzando la linea cellulare di fotorecettori 661W.

Microglia cells represent the main mediator responsible for immune defence inside the central nervous system. These cells intervene in many physiological processes and ensure neural trophism to maintain cerebral homeostasis.
Historically, two activated microglia have been recognized, defined as M1 and M2 (pro and anti-inflammatory, respectively). In reality, there is a more complex and heterogeneous phenotypic distribution of microglia, constituted by a gradient of activation states between these two extreme categories.
Recent studies have shown the contribution of microglia to various neurodegenerative diseases including retinal ones, not only as an outcome but also as part of the cause of the disease.
This thesis project focuses on the evaluation of active ingredients known for their involvement in important metabolic pathways, to assess their capacity to reprogram microglial metabolism and inhibit pro-inflammatory activation of microglia.
For this reason, the ability of this compounds to contrast the pro-inflammatory polarization of LPS-induced microglia has been tested. Experiments were carried out on the stable murine line BV2 and primary murine-derived microglia.
The evaluation of the different compounds was performed by testing the genetic expression and protein levels of typical markers of the two activation states using, respectively, RT-qPCR, fluorescence microscopy and Western Blot. Finally, the neuroprotective potential of the selected active ingredients was tested in vitro using the photoreceptors cell line 661W.