• BRAF
• neoplasie follicolari
• PAX8/PPARgamma
• RAS
• RET/PTC

Il mio progetto di tesi, svolto nell’Ospedale Santa Chiara di Pisa, presso il laboratorio di Patologia Molecolare del Sistema Endocrino, si è focalizzato sullo studio delle neoplasie tiroidee ad architettura follicolare.
Queste comprendono sia tumori benigni, quali l’adenoma follicolare, che tumori maligni, quali il carcinoma follicolare e una variante del carcinoma papillare: la variante follicolare.
I tumori della tiroide mostrano frequenti alterazioni genetiche, alcune delle quali sono specifiche per un determinato tumore. Quelle riscontrate nelle neoplasie tiroidee ad architettura follicolare coinvolgono i geni della famiglia RAS (H-, N-, K-RAS), il gene BRAF e i riarrangiamenti PAX8/PPARγ e RET/PTC.
L’obiettivo della mia tesi è di procedere a una caratterizzazione molecolare approfondita delle neoplasie tiroidee ad architettura follicolare, in particolare, analizzando le mutazioni dei geni della famiglia RAS e BRAF e i riarrangiamenti PAX8/PPARγ e RET/PTC.
Inoltre, all’analisi molecolare è stata affiancata un’analisi morfologica, in modo da verificare la presenza di eventuali correlazioni tra i due aspetti.
La casistica analizzata consiste di 116 neoplasie ad architettura follicolare che nel dettaglio sono: 43 varianti follicolari del carcinoma papillare (FVPTC), 42 adenomi follicolari (FA) e 31 carcinomi follicolari (FTC).
Il materiale utilizzato è tessuto fissato in formalina e incluso in paraffina (FFPE).
Dopo aver deparaffinato le varie sezioni istologiche e aver fatto un arricchimento tissutale, si procede con l’estrazione del DNA e dell’RNA, tramite l’utilizzo di Kit commerciali specifici.
L’analisi dei riarrangiamenti PAX8/PPARγ e RET/PTC è stata eseguita tramite RT-PCR in real time. Inoltre come riferimento abbiamo utilizzato il gene housekeeping GAPDH.
L’analisi mutazionale dei geni della famiglia RAS quali N-RAS (codone 61), H-RAS (codone 61), K-RAS (codoni 12 e 13) e del gene BRAF (V600E) è stata eseguita tramite PCR in real time; a seguire la tecnica di “High Resolution Melting”.
Su 116 campioni che ho esaminato, 86 sono risultati wild-type per tutti i geni presi in esame.
Per il gene N-RAS ho ottenuto 1 mutazione negli FA, 9 mutazioni negli FTC e 7 mutazioni negli FVPTC. Per il gene H-RAS ho trovato 4 mutazioni negli FA, 4 mutazioni negli FTC e 3 mutazioni negli FVPTC. Sono risultati, invece, tutti wild –type i campioni per il gene K-RAS e solo 2 mutazioni V600E per il gene BRAF.
Per quanto riguarda i riarrangiamenti PAX8/PPARγ e RET/PTC sono state rilevate una mutazione riguardante la variante 7 negli FTC per il primo riarrangiamento e una mutazione RET/PTC 3 negli FVPTC per il secondo.
Un risultato degno di nota, ottenuto dalla nostra casistica, è stato una frequenza elevata della mutazione di N-RAS nella variante follicolare del carcinoma papillare.
Inoltre è stato rilevato un aumento della frequenza di mutazioni di RAS all’aumentare dell’aggressività del tumore, con percentuale più bassa negli FA, a seguire gli FVPTC e per concludere con una percentuale più alta negli FTC.
La nostra prospettiva futura è quella di ampliare la casistica per consentire ulteriori approfondimenti sui dati ottenuti e, parallelamente, di cercare altri bersagli molecolari per caratterizzare ulteriormente la variante follicolare dei carcinomi papillari, con l’obiettivo di trovare sottogruppi di questo istotipo con caratteristiche dei PTC e altri con caratteristiche simili agli FA e agli FTC.