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Tesi etd-10212015-193828


Thesis type
Tesi di laurea specialistica LC5
Author
PITINGARO, VALERIA
URN
etd-10212015-193828
Title
Standardizzazione e preparazione della frazione mitocondriale da cellule H28 di mesotelioma nell' ambito del progetto "proteoma umano"
Struttura
FARMACIA
Corso di studi
FARMACIA
Commissione
relatore Prof. Lucacchini, Antonio
correlatore Dott.ssa Giusti, Laura
Parole chiave
  • Western Blot
  • strokes
  • standardizzazione
  • purificazione
  • progetto proteoma umano
  • mitocondri
  • mesotelioma pleurico maligno
  • isolamento
  • HeLa
  • H28
  • centrifugazione in gradiente di saccarosio
  • cellule
Data inizio appello
11/11/2015;
Consultabilità
completa
Riassunto analitico
Lo scopo della tesi è quello di purificare i mitocondri dalle cellule H 28 di mesotelioma pleurico maligno. Abbiamo testato il protocollo Pieroni, ossia la centrifugazione in gradiente di saccarosio, in cui le cellule vengono rotte meccanicamente tramite strokes e sonicate con la tecnica ad immersione. Tramite una serie di centrifughe tra cui quella sul gradiente , otterremo un anello di mitocondri all'interfaccia del gradiente. Anche sulle cellule HeLa è stato testato un protocollo d'isolamento per la frazione mitocondriale, tramite l'uso di detergenti di lisi cellulare. Tali protocolli sono stati seguiti da una corsa elettroforetica per l'adesione delle proteine mitocondriali sul gel di poliacrilammide al 12% ed in seguito dal trasferimento di tali proteine su membrana in PVDF. Al termine del blot, tramite lo strumento di lettura con chemioluminescienza abbiamo ottenuto le immagini riferenti la frazione mitocondriale purificata dalle cellule H28 ed HeLa.
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