• chitosano
• ciclodestrina
• compresse
• gastroresistenza
• Gonacon

Il progetto di Tesi si inserisce all’avvio del progetto Ministeriale “Gonacon” IZSLT che prevede la manipolazione del prodotto iniettabile commerciale GonaCon con il fine ultimo di ottenere immunocontraccezione orale del cinghiale. Infatti, GonaCon, messo a punto dal National Wildlife Research Center negli USA come vaccino monodose per la gestione della fauna selvatica, causa la produzione di anticorpi che neutralizzano il GnRH (Gonadotropin-Releasing Hormone) e viene commercializzato come emulsione iniettabile ad uso esclusivamente veterinario; è costituito da una parte acquosa contenente il derivato GnRH coniugato alla proteina carrier (Blue Protein) e una parte oleosa di AdjuVac (olio minerale con l’adiuvante vaccinale Mycobacterium Avium). Il prodotto è somministrabile esclusivamente tramite iniezione intramuscolare: se somministrato tal quale per via orale viene rapidamente degradato a livello gastrico e ha bassa capacità di permeazione attraverso la mucosa intestinale.
Lo studio formulativo affrontato prevede la realizzazione di compresse con matrice gastroresistente, in grado di resistere a lunghi tempi di permanenza nello stomaco dell’animale. Inoltre, data da natura bifasica del prodotto Gonacon, è prevista una porzione di polvere diluente con elevata capacità adsorbente di olio minerale. Dopo una prima valutazione delle capacità adsorbenti delle polveri (Sorption Capacity), sono state selezionate bentonite, zeolite e calcio carbonato, combinate in miscela di polveri adatte alla compressione diretta, variando il rapporto di glidanti, diluenti, leganti e polimero gastroresistente. Saggi qualitativi di FU XII sono stati applicati per individuare le miscele e le condizioni di compressione migliori sulla base di aspetto, uniformità di massa, resistenza alla compressione e friabilità. Le compresse sono state ottenute per compressione diretta utilizzando la comprimitrice “Unique” (RONCHI lab s.r.l), appartenente alle comprimitrici alternative e la gastroresitenza è stata ottenuta impiegando Eudragit L-100, direttamente in compressione. La miscela con il risultato migliore è stata testata successivamente in base alla gastro-resistenza secondo FU XII ed. ma adattando il protocollo al tempo di transito gastrointestinale del cinghiale, che è più lungo di quello umano. Lo studio è stato compiuto impiegando acido acetil salicilico, in compressione diretta, e olio fluoresceinato per la componente oleosa.
In vista della lavorazione del Gonacon e la necessità di proteggere e promuovere l’assorbimento orale dell’antigene proteico, è stata compiuta la biofunzionalizzazione di derivati di chitosano con catene quaternarie e ciclodestrina metilata pendente. Il coniugato è stato selezionato sulla base di ricerche pregresse (Migone C. 2020) in cui ha dimostrato la capacità di complessare e stabilizzare peptidi promuovendone l’attraversamento di modelli cellulari intestinali, come l’ottenimento di nanoparticelle a base del coniugato per il trasporto di dalargina. Il polimero è stato preparato in scale up applicando un protocollo precedentemente descritto (Piras A.M. 2018), ottimizzando le condizioni che consentissero rese e grado di sostituzione della ciclodestrina elevati. Gli intermedi e il prodotto sono stati caratterizzati tramite H-NMR per la determinazione dei gradi di sostituzione e Debye Plot per il peso molecolare.

Migone, Chiara; Mattii, Letizia; Giannasi, Martina; Moscato, Stefania; Cesari, Andrea; Zambito, Ylenia; Piras, Anna Maria (2020). Nanoparticles Based on Quaternary Ammonium Chitosan-methyl-β-cyclodextrin Conjugate for the Neuropeptide Dalargin Delivery to the Central Nervous System: An In Vitro Study.
Piras, Anna Maria; Fabiano, Angela; Chiellini, Federica; Zambito, Ylenia (2018). Methyl-β-cyclodextrin quaternary ammonium chitosan conjugate: nanoparticles vs macromolecular soluble complex.