Thesis etd-10102011-141208 |
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Thesis type
Tesi di specializzazione
Author
AMPOLA, MASSIMILIANO
URN
etd-10102011-141208
Thesis title
Studio dell'acquisizione di virulenza in Legionella pneumophila attraverso analisi d'espressione genita e dell'infettivita di Acanthamoeba polyphaga
Department
MEDICINA E CHIRURGIA
Course of study
MICROBIOLOGIA E VIROLOGIA
Supervisors
relatore Prof. Bruschi, Fabrizio
Keywords
- Acanthamoeba polyphaga
- Legionella pneumophila
Graduation session start date
28/10/2011
Availability
Full
Summary
L’acqua erogata può essere veicolo di trasmissione di microrganismi potenzialmente patogeni e Legionella spp. ubiquitario negli ambienti acquatici naturali e artificiali è intrinsecamente resistente a procedure di bonifica e agente eziologico di una patologia grave ad elevata letalità.
Molteplici fattori di stress quali la carenza di nutrienti, le variazioni di temperatura, la presenza di disinfettanti, possono nell’acqua indurre Legionella spp. ad aumentare la permanenza all’interno delle amebe, loro ospiti naturali, consentendo al microrganismo di ottenere protezione contro l’attività battericida dei comuni disinfettanti e garantendone di conseguenza la persistenza nella rete. Le evidenze scientifiche dimostrano oramai che l’eradicazione di Legionella spp. è impossibile ed è quindi necessario adottare una corretta gestione del rischio per tenere sotto controllo la colonizzazione delle rete idrica.
Scopo di questa tesi stato verificare se l’espressione di alcuni geni di virulenza, implicati nell’internalizzazione in cellule ospiti, potesse essere regolata dall’esposizione al cloro e se questa induzione fosse in grado di regolare la cinetica di moltiplicazione di Legionella in Acanthamoeba polyphaga.
Ceppi rappresentativi di Legionella pneumophila sg 1 sono stati sottoposti a tipizzazione genetica e sequenziati, Le prove di suscettibilità all’attività battericida del cloro sono state effettuate in accordo alla norma BS EN 1040:1997. I livelli di espressione delle regioni codificanti il sistema di secrezione di tipo IVA (locus lvh), i prodotti del gene mip (macrophage infectivity potentiator) e del regione rtxA (repeat in toxin) sono stati studiati mediante un’analisi quantitativa relativa. Infine la variazione della virulenza è stata valutata anche attraverso co-colture di Legionella pneumophila in Acanthamoeba polyphaga.
Molteplici fattori di stress quali la carenza di nutrienti, le variazioni di temperatura, la presenza di disinfettanti, possono nell’acqua indurre Legionella spp. ad aumentare la permanenza all’interno delle amebe, loro ospiti naturali, consentendo al microrganismo di ottenere protezione contro l’attività battericida dei comuni disinfettanti e garantendone di conseguenza la persistenza nella rete. Le evidenze scientifiche dimostrano oramai che l’eradicazione di Legionella spp. è impossibile ed è quindi necessario adottare una corretta gestione del rischio per tenere sotto controllo la colonizzazione delle rete idrica.
Scopo di questa tesi stato verificare se l’espressione di alcuni geni di virulenza, implicati nell’internalizzazione in cellule ospiti, potesse essere regolata dall’esposizione al cloro e se questa induzione fosse in grado di regolare la cinetica di moltiplicazione di Legionella in Acanthamoeba polyphaga.
Ceppi rappresentativi di Legionella pneumophila sg 1 sono stati sottoposti a tipizzazione genetica e sequenziati, Le prove di suscettibilità all’attività battericida del cloro sono state effettuate in accordo alla norma BS EN 1040:1997. I livelli di espressione delle regioni codificanti il sistema di secrezione di tipo IVA (locus lvh), i prodotti del gene mip (macrophage infectivity potentiator) e del regione rtxA (repeat in toxin) sono stati studiati mediante un’analisi quantitativa relativa. Infine la variazione della virulenza è stata valutata anche attraverso co-colture di Legionella pneumophila in Acanthamoeba polyphaga.
File
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