• coltura in vitro
• espressione differenziale geni omeotici
• gene SHOOT MERISTEMLESS-LIKE
• geni WUSCHEL-LIKE
• Lactuca sativa var. longifolia c. Romana

La coltura in vitro è un valido strumento impiegato per lo studio delle interazioni geniche implicate nella rigenerazione, fenomeno strettamente legato alla totipotenza cellulare. Nella presente tesi, espianti cotiledonari di Lactuca sativa var. longifolia cv. Romana sono coltivati su di un mezzo nutritivo di Murashige e Skoog, addizionato con 30 g/L di saccarosio, 0,5 mg/L della citochinina benzilaminopurina e 0,04 mg/L dell’auxina acido naftalenacetico. Gli espianti sono osservati al microscopio binoculare ed analizzati istologicamente in quattro tempi diversi: al momento del taglio (T0) e dopo 4, 7 e 12 giorni (T4, T7, T12) di permanenza sul substrato di rigenerazione. Al microscopio, i primi segni di rigenerazione si evidenziano a partire dal settimo giorno, mentre le sezioni istologiche mostrano già al quarto giorno piccole cellule poco vacuolizzate e ricche in citoplasma, organizzate in strutture assimilabili a centri meristematici e/o embriogenici in neoformazione. L’ipotesi che gli espianti di lattuga possano acquisire così velocemente sia la totipotenza meristematica sia quella zigotica, è avvalorata dall’analisi di espressione di geni codificanti fattori di trascrizione homeobox, legati a fasi fondamentali dello sviluppo degli organismi vegetali. I geni scelti sono gli omologhi di WUSCHEL-LIKE1 (WUSL1), WUSL2 e SHOOT MERISTEMLESS-LIKE1 (STML1) in lattuga, analizzati con metodologia qPCR real-time dopo estrazione di RNA dagli espianti ai tempi T0, T4, T7 e T12 e sua retrotrascrizione. Le variazioni di espressione di questi geni sono in accordo con la rapida acquisizione di totipotenza cellulare manifestata dagli espianti cotiledonari di lattuga.