• vettori lentivirali pseudotipizzati
• SARS-CoV-2
• pseudotyped lentiviral vectors
• test di neutralizzazione
• neutralization test

SARS-CoV-2 è un virus a ssRNA+ appartenente alla famiglia Coronavirinae. Si tratta di un agente patogeno classificato con un livello di biosicurezza 3 (BSL-3). Per studiare la fase di ingresso del virus nella cellula è possibile, tuttavia, ricorrere a vettori lentivirali pseudotipizzati (PLV), che possono essere manipolati anche in BSL-1 o -2. Un PLV è una particella virale che possiede le proteine strutturali di un Lentivirus e la glicoproteina recettoriale di SARS-CoV-2, esso avrà quindi la struttura di un Lentivirus ma il tropismo di SARS-CoV-2.Lo scopo della tesi è stata produzione di PLV-S e il loro utilizzo in test di neutralizzazione. La produzione di PLV è avvenuta con un sistema di terza generazione. Abbiamo dimostrato come l’ottimizzazione dei rapporti tra i plasmidi nella miscela di trasfezione sia importante per aumentare la resa dei PLV-S. Per migliorare, invece, l’efficienza di trasduzione con PLV-S, abbiamo ottenuto la linea 293T/ACE2.Il lavoro di tesi dimostra inoltre come la spinoculazione, ovvero la centrifugazione delle piastre inoculate con i PLV, aumenti l’efficienza di trasduzione, e come invece metodiche di concentrazione dei virioni, come l’ultracentrifugazione, siano inefficaci per aumentare la resa. I PLV-S sono stati utilizzati in test di neutralizzazione su campioni di siero di pazienti guariti dal COVID-19 o vaccinati con vaccini a mRNA o a vettore virale.