Thesis etd-06292016-222911 |
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Thesis type
Tesi di specializzazione (5 anni)
Author
MEDICI, CHIARA
URN
etd-06292016-222911
Thesis title
Trichinellosi: una tipica infezione foodborne; sierodiagnosi e risposta immunitaria nell'uomo.
Department
RICERCA TRASLAZIONALE E DELLE NUOVE TECNOLOGIE IN MEDICINA E CHIRURGIA
Course of study
MICROBIOLOGIA E VIROLOGIA
Supervisors
relatore Prof. Bruschi, Fabrizio
Keywords
- Cellular immunology
- Human trichinellosis
- Immune response
- Trichinella britovi
- Trichinella pseudospiralis
Graduation session start date
22/07/2016
Availability
Withheld
Release date
22/07/2086
Summary
La trichinellosi è una infezione parassitaria zoonotica causata da un nematode del genere Trichinella, ha una distribuzione globale. In questo genere ci sono nove specie riconosciute e due clade: uno incapsulato ed uno non incapsulato. La risposta immunitaria cellulare alla Trichinella è ben nota nei roditori, in cui dopo una breve risposta Th1 segue polarizzazione Th2, mantenuta durante tutto il periodo dell'infezione. Tuttavia, gli studi sull’uomo sono scarsi.
Sono stati testati 31 campioni di soggetti reclutati da un focolaio epidemico verificatosi in Garfagnana nel 2012.
La sierodiagnosi è stata effettuata con tre diversi kit ELISA commerciali e confrontata con il test di riferimento, ELISA, test in house, messo a punto e validato dall’Istituto Superiore di Sanità (ISS). I test sierologici sono stati messi a confronto con il test di riferimento e ne è stata valutata la concordanza complessiva e la costante di Cohen.
E’ stato inoltre effettuato uno studio della risposta immunitaria cellulare nella fase muscolare di una paziente infettato insieme ad altre 51 persone in un focolaio di trichinellosi in cui non è stato possibile identificare la specie di Trichinella coinvolta. Il campione di sangue è stato raccolto dopo 10 mesi di infezione.
Sono state isolate le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMCs) e incubate con antigeni secreti/escreti, (E/S), di due specie Trichinella: T.spiralis (T1) e T.pseudospiralis (T4) per determinarne l’indice di proliferazione. Altri PBMCs sono stati utilizzati per produrre cloni T antigene specifici il cui fenotipo (T helper o cellule citotossiche) e profilo citochinico (IFN - ɤ, IL- 17, IL- 4) sono stati analizzati rispettivamente con citometria a flusso e test ELISA.
Attraverso l'applicazione di tecniche di immunologia cellulare, è stato possibile identificare la specie di Trichinella responsabile dell'infezione, confermando i risultati precedentemente ottenuti mediante analisi sierologica. Sulla base dei risultati ottenuti, è possibile concludere che la specie responsabile dell’infezione era T.pseudospiralis. Tutti i risultati mostrano che nel corso della trichinellosi umana si osserva una risposta mista di Th1 e Th2. Per la prima volta è stata rivelata in un’infezione cronica umana la presenza di cellule Th17.
Trichinellosis is a zoonotic parasitic infection caused by a nematode of the genus Trichinella, with a worldwide distribution. In this genre there are nine recognized species and two clades: one encapsulated and one non-encapsulated. The cellular immune response to Trichinella is well known in the rodent, in which after a short Th1 response a Th2 polarization follows which is maintained during the whole period of the infection. However, the knowledge in human infection is poor.
It has been tested 31 samples of subjects recruited from an outbreak occurred in Garfagnana in 2012.
The serodiagnosis was carried out with three different commercial ELISA kits and compared with the reference test, ELISA tests in house, developed and validated by the Istituto Superiore di Sanita (ISS). The above serologic tests have been compared with the reference test and the overall acceptance and Cohen’s value has been evaluated.
It was also carried out a study of the cellular immune response in the muscle of a patient being infected together with other 51 people in an outbreak of trichinosis in which it was not possible to identify the Trichinella species involved. The blood sample was collected after 10 months of infection.
Were isolated from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and incubated with antigens secreted / excreted, (E/S), two species Trichinella : T. spiralis ( T1) and T.pseudospiralis (T4) to determine the index of proliferation. Other PBMCs has been used to produce T antigen specific clones whose phenotype (T helper or cytotoxic cells) and cytokine profile (IFN - ɤ , IL- 17 , IL- 4) were analysed respectively by cytometry flow and ELISA. Through the application of cellular immunology techniques, it has been possible to identify the species of Trichinella infection responsible; confirming the results previously obtained by serological analysis. Based on the results obtained, it is possible to conclude that the causative species was T.pseudospiralis. All results show that in the course of human trichinosis is a mixed Th1 and Th2 response. For the first time was revealed in a chronic infection of human Th17 cells.
Sono stati testati 31 campioni di soggetti reclutati da un focolaio epidemico verificatosi in Garfagnana nel 2012.
La sierodiagnosi è stata effettuata con tre diversi kit ELISA commerciali e confrontata con il test di riferimento, ELISA, test in house, messo a punto e validato dall’Istituto Superiore di Sanità (ISS). I test sierologici sono stati messi a confronto con il test di riferimento e ne è stata valutata la concordanza complessiva e la costante di Cohen.
E’ stato inoltre effettuato uno studio della risposta immunitaria cellulare nella fase muscolare di una paziente infettato insieme ad altre 51 persone in un focolaio di trichinellosi in cui non è stato possibile identificare la specie di Trichinella coinvolta. Il campione di sangue è stato raccolto dopo 10 mesi di infezione.
Sono state isolate le cellule mononucleate del sangue periferico (PBMCs) e incubate con antigeni secreti/escreti, (E/S), di due specie Trichinella: T.spiralis (T1) e T.pseudospiralis (T4) per determinarne l’indice di proliferazione. Altri PBMCs sono stati utilizzati per produrre cloni T antigene specifici il cui fenotipo (T helper o cellule citotossiche) e profilo citochinico (IFN - ɤ, IL- 17, IL- 4) sono stati analizzati rispettivamente con citometria a flusso e test ELISA.
Attraverso l'applicazione di tecniche di immunologia cellulare, è stato possibile identificare la specie di Trichinella responsabile dell'infezione, confermando i risultati precedentemente ottenuti mediante analisi sierologica. Sulla base dei risultati ottenuti, è possibile concludere che la specie responsabile dell’infezione era T.pseudospiralis. Tutti i risultati mostrano che nel corso della trichinellosi umana si osserva una risposta mista di Th1 e Th2. Per la prima volta è stata rivelata in un’infezione cronica umana la presenza di cellule Th17.
Trichinellosis is a zoonotic parasitic infection caused by a nematode of the genus Trichinella, with a worldwide distribution. In this genre there are nine recognized species and two clades: one encapsulated and one non-encapsulated. The cellular immune response to Trichinella is well known in the rodent, in which after a short Th1 response a Th2 polarization follows which is maintained during the whole period of the infection. However, the knowledge in human infection is poor.
It has been tested 31 samples of subjects recruited from an outbreak occurred in Garfagnana in 2012.
The serodiagnosis was carried out with three different commercial ELISA kits and compared with the reference test, ELISA tests in house, developed and validated by the Istituto Superiore di Sanita (ISS). The above serologic tests have been compared with the reference test and the overall acceptance and Cohen’s value has been evaluated.
It was also carried out a study of the cellular immune response in the muscle of a patient being infected together with other 51 people in an outbreak of trichinosis in which it was not possible to identify the Trichinella species involved. The blood sample was collected after 10 months of infection.
Were isolated from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and incubated with antigens secreted / excreted, (E/S), two species Trichinella : T. spiralis ( T1) and T.pseudospiralis (T4) to determine the index of proliferation. Other PBMCs has been used to produce T antigen specific clones whose phenotype (T helper or cytotoxic cells) and cytokine profile (IFN - ɤ , IL- 17 , IL- 4) were analysed respectively by cytometry flow and ELISA. Through the application of cellular immunology techniques, it has been possible to identify the species of Trichinella infection responsible; confirming the results previously obtained by serological analysis. Based on the results obtained, it is possible to conclude that the causative species was T.pseudospiralis. All results show that in the course of human trichinosis is a mixed Th1 and Th2 response. For the first time was revealed in a chronic infection of human Th17 cells.
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