• Acido ialuronico
• CD44
• matrice extracellulare
• cresta neurale cranica
• sviluppo embrionale

RIASSUNTO

L’acido ialuronico è il principale glicosaminoglicano presente nella matrice extracellulare di tutti i vertebrati. È un polisaccaride lineare composto di disaccaridi di acido glucuronico e N-acetilglusosamina e nonostante la semplicità della sua struttura chimica è coinvolto in molti processi biologici come motilità cellulare e differenziamento. L’acido ialuronico è sintetizzato da tre diverse sintasi denominate Has1, Has2, Has3 ed esplica le sue funzioni interagendo con proteoglicani della matrice e mediante l’interazione con specifici recettori, il più importante dei quali è CD44, glicoproteina di membrana coinvolta nell’adesione cellula–cellula e cellula–matrice. Nel nostro laboratorio è stato recentemente effettuato uno studio che ha dimostrato che XHas2 e XCD44 sono necessari in eventi di migrazione cellulare come ad esempio nella migrazione delle cellule della muscolatura ipoassiale durante lo sviluppo di Xenopus laevis. E’stato inoltre messo in evidenza che XHas2 e XCD44 sono espressi a livello della regione branchiale dell’embrione durante lo sviluppo, lasciando presupporre un possibile ruolo di questi geni nello sviluppo craniofacciale. La mia tesi di Laurea si inserisce in questa problematica ed ha avuto lo scopo di analizzare un eventuale ruolo di XHas2 e XCD44 nello sviluppo craniofacciale.
La cresta neurale (NC) cranica è una popolazione di cellule altamente specializzata presente nello sviluppo embrionale di tutti i vertebrati che si origina al confine tra la piastra neurale e l’epidermide presuntiva. In seguito le cellule della NC vanno incontro ad un processo di transizione epitelio–mesenchima che gli conferisce l’abilità a migrare. Iniziano così a segregare dalla regione dorsale del tubo neurale lungo differenti “pathways” migrando ventralmente a livello delle tasche branchiali da cui si originano gli archi viscerali mandibolare, ioideo e branchiali. Le cellule della cresta neurale cranica differenzieranno quindi dando origine alle cartilagini craniofacciali e contribuendo alla formazione della muscolatura della testa ed alla formazione dei gangli dei nervi cranici. Per questi motivi la cresta neurale cranica risulta essere un eccellente modello per studiare in vivo la regolazione di eventi di migrazione e differenziamento cellulare. In particolare, durante la migrazione delle creste neurali si osserva una diminuzione dell’adesione cellulare al neuroepitelio e un corrispondente aumento dell’adesione alla matrice extracellulare.
Durante il mio internato di tesi ho quindi effettuato esperimenti di ibridazione in situ, a diversi stadi di sviluppo coincidenti con le fasi di migrazione e differenziamento delle cellule della cresta neurale cefalica, per definire il “pattern” di espressione genica spazio-temporale di XHas2 e XCD44 durante lo sviluppo craniofacciale. Ho inoltre confrontato l’espressione dei due geni con marcatori molecolari specifici per le cellule della NC cranica e per le loro sottopopolazioni. Per cercare di capire la funzione di XHas2 e XCD44 durante lo sviluppo delle cellule della NC cranica ho intrapreso uno studio funzionale di questi geni mediante esperimenti di perdita di funzione e ho effettuato l’analisi del fenotipo degli embrioni manipolati tramite la colorazione istologica con Alcian Blu che mette in evidenza le cartilagini craniofacciali.