logo SBA

ETD

Archivio digitale delle tesi discusse presso l’Università di Pisa

Tesi etd-06252008-164020


Tipo di tesi
Tesi di laurea specialistica
Autore
GUALDANI, ROBERTA
URN
etd-06252008-164020
Titolo
E2Red: una sonda proteica per la misura combinata del cloruro e del pH
Dipartimento
SCIENZE MATEMATICHE, FISICHE E NATURALI
Corso di studi
CHIMICA
Relatori
Relatore Prof. Beltram, Fabio
Relatore Dott. Arosio, Daniele
Parole chiave
  • cloruro intracellulare
  • E2GFP
  • pH intracellulare
  • sonda proteica
Data inizio appello
17/07/2008
Consultabilità
Parziale
Data di rilascio
17/07/2048
Riassunto
Un’importante applicazione delle proteine fluorescenti è il loro utilizzo come indicatori di processi biologici, quali la concentrazione dei metaboliti o l’attività enzimatica.
Tali sonde proteiche rappresentano una valida alternativa agli indicatori fluorescenti organici, grazie alla possibilità di essere inserite all’interno della cellula mediante trasferimento genico (e non con immersione o iniezione) e di essere indirizzate in vari compartimenti subcellulari mediante fusione con specifiche sequenze di localizzazione.
In questo lavoro di tesi viene descritta un nuova sonda proteica, denominata E2Red, per la misura combinata del cloruro e del pH. Essa è costituita da un mutante della proteina GFP, E2GFP (F64L, S65T, T203Y) sensibile alla concentrazione del cloruro e al pH, e da una proteina rossa, la DsRed monometrica, la cui fluorescenza è indipendente da entrambi i parametri e funge da elemento di normalizzazione.
Nella prima fase di questo lavoro mi sono concentrata sulla taratura in vivo di E2Red, costruendo curve di calibrazione, sia per il cloruro che per il pH. Inoltre ho utilizzato E2Red per effettuare misure statiche e dinamiche del cloruro e del pH intracellulari. Infine ho mostrato come, fondendo al biosensore una sequenza codificante per i primi 20 amminoacidi della proteina di membrana GAP43, è possibile ancorare selettivamente E2Red sulla membrana citoplasmatica .
File