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Archivio digitale delle tesi discusse presso l’Università di Pisa

Tesi etd-06232019-224517


Tipo di tesi
Tesi di laurea magistrale
Autore
DONADEL, GIORGIA
URN
etd-06232019-224517
Titolo
Valutazione e caratterizzazione delle carbossilesterasi (CES) nel polmone di suino
Dipartimento
BIOLOGIA
Corso di studi
BIOLOGIA MOLECOLARE E CELLULARE
Relatori
relatore Paolicchi, Aldo
relatore Longo, Vincenzo
Parole chiave
  • 4-methylumbelliferylacetate
  • 4-metilumbelliferilacetato
  • 4-MUA
  • analisi cinetica
  • BNPP
  • carbossilesterasi
  • carboxylesterases
  • CES
  • CES1
  • cynetic analysis
  • endoplasmatic reticulum
  • espressione genica
  • FD
  • fluorescein diacetate
  • fluoresceina diacetato
  • gene expression
  • HXEL retention sequence
  • inibition assays
  • inibizione
  • KDEL receptor
  • lung
  • p-nitrofenilacetato
  • p-nitrophenyl acetate
  • pig
  • pig liver esterase
  • PLE
  • PMSF
  • pNPA
  • polmone
  • recettore KDEL
  • reticolo endoplasmatico
  • sequenza HXEL
  • serine-esterases
  • serino-esterasi
  • suino
Data inizio appello
15/07/2019
Consultabilità
Non consultabile
Data di rilascio
15/07/2089
Riassunto
Riassunto
Le carbossilesterasi (CES) sono serino-esterasi classificate come enzimi metabolizzanti di fase I capaci di idrolizzare esteri, tioesteri e ammidi nei corrispondenti alcol e acidi liberi.Le CES del suino, appartenenti alla famiglia CES1 dei mammiferi, sono dette Pig Liver Esterase (PLE) e si trovano localizzate nel lume del RE grazie al legame tra la sequenza HXEL posta al C-terminale della proteina e il recettore KDEL inserito nella membrana del RE.Lo scopo di questo studio è stato quello di investigare l'attività catalitica nei confronti dei substrati p-nitrofenilacetato (pNPA), 4-metilumbelliferilacetato (4-MUA) e fluoresceina diacetato (FD), la suscettibilità inibitoria e l'espressione genica delle CES nel tessuto polmonare di 8 maiali di controllo. I campioni hanno mostrato attività idrolitica nei confronti dei 3 substrati con valori di Km comparabili tra le frazioni citosoliche e quelle microsomiali suggerendo che gli enzimi coinvolti in tali attività potrebbero essere gli stessi.I tessuti polmonari hanno mostrato un'alta variabilità interindividuale sia nei livelli di attività enzimatica che nell'espressione genica ciò potrebbe essere dovuto a fattori genetici e/o ambientali.Gli studi di inibizione hanno mostrato che solo i composti BNPP e PMSF sono in grado di inibire l'attività nei confronti della FD, mentre nessun'altra attività inibitoria è stata rilevata da parte degli inibitori di altre esterasi escludendo il loro ruolo nell'idrolisi dei 3 substrati.

Abstract
Carboxylesterases (CES) are serine-esterases classified as phase I metabolizing enzymes that hydrolyse esters, thioesters and amides into the corresponding free alcohol and acids. The pig CES, belong to the CES1 mammalian family and they are called Pig Liver Esterase (PLE). They are located in the lumen of ER thanks to the link between the HXEL retention sequence placed at the C-terminal of the protein and the KDEL receptor inserted in the membrane of ER . The aim of this study was to investigate the catalytic activity against p-nitrophenyl acetate (pNPA), 4-methylumbellifylyl acetate (4-MUA) and fluorescein diacetate (FD) substrates, inhibitory susceptibility and expression of CES gene in the lung tissue of 8 control pigs. The samples showed hydrolytic activity compared to the 3 substrates with comparable Km values between the cytosolic and microsomal fractions, suggesting that the enzymes involved in these activities could be same. Lung tissues have shown high interindividual variability both in activity enzyme levels and in gene expression levels this could be due to genetic and/or environmental factors. Inhibition studies have shown that only the BNPP and PMSF compounds are able to inhibit activity against FD, while no other inhibitory activity has been detected by other esterase inhibitors excluding their role in the hydrolysis of the 3 substrates.
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