• centrifugation
• centrifugazione
• congelamento
• cooling
• freezing
• Ozone
• Ozono
• plasma seminale
• refrigerazione
• seminal plasma
• spermatozoa
• spermatozoi
• Stallion
• Stallone

Lo scopo di questo studio è stato quello di valutare l’effetto dell’aggiunta di ozono medicale, dopo la diluizione, sui parametri cinetici di seme equino refrigerato e congelato. Sono stati prelevati 3 eiaculati da ciascuno di 5 stalloni, con caratteristiche seminali normali, per un totale di 15 eiaculati. Per quanto riguarda la refrigerazione, sono stati impiegati sia eiaculati tali e quali che eiaculati privati del plasma seminale. In ogni caso, ciascun eiaculato è stato diluito in un medium commerciale in modo da ottenere 3 aliquote di 250x106 spermatozoi/mL. Ciascuna aliquota è stata poi sottoposta a trattamento con concentrazioni di ozono pari a 0 µg/mL, 5 µg/mL, 15 µg/mL e conservata a 4°C per 24 e 48 ore.
Per quanto riguarda il seme congelato, è stato diluito in rapporto 1:1 con un medium commerciale, centrifugato per la rimozione del plasma seminale e riesteso in diluente contenete glicerolo, in modo da ottenere 3 aliquote con una concentrazione finale di 150x106 spermatozoi/mL. Ciascuna aliquota è stata poi sottoposta a trattamento con concentrazioni di ozono pari a 0 µg/mL, 5 µg/mL, 15 µg/mL e sottoposta a congelamento.
La valutazione delle caratteristiche cinetiche dei campioni di seme è stata effettuata mediante procedura denominata CASA (Computer Assisted Sperm Analysis), previa incubazione a 37°C, dopo 24 e 48 ore di refrigerazione e a 5, 15 e 60 minuti dopo lo scongelamento. Su ciascun campione sono stati valutati: motilità totale, motilità progressiva, VAP, VSL, VCL, STR, LIN, ALH, BCF e WOB. In nessun caso è stato notato un effetto significativo del trattamento con ozono rispetto al gruppo di controllo. In letteratura esistono soltanto due studi sull’impiego dell’ozono nella conservazione del seme equino che giungono a conclusioni differenti. Uno dei due studi non ha rilevato nessun effetto del trattamento, come è avvenuto in questa tesi, l’altro ha invece rilevato un effetto positivo su alcuni parametri delle concentrazioni di 15 µg/mL, al contrario di quanto riscontrato in questa tesi. Per questi motivi, sono necessari altri studi per meglio chiarire gli effetti dell’ozono medicale sui processi di conservazione del seme equino.

The aim of this study was to evaluate the effect of the addition of medical ozone, after dilution, on the kinetic parameters of refrigerated and frozen equine semen. Three ejaculates were collected from each of 5 stallions, with normal seminal characteristics, for a total of 15 ejaculates. As regards the refrigerated semen, the seminal plasma wasn’t removed in the first sampling, while in the second and third sampling it was removed by centrifugation; 3 aliquots containing 250x10^6 spermatozoa/mL were obtained for all samples.
As regards the frozen semen, the ejaculate was diluted in a 1:1 ratio with a commercial diluent and centrifuged to remove the seminal plasma. The semen was then re-extended in a diluent containing glycerol in order to reach a final concentration of 150x10^6 spermatozoa/mL. The semen was then divided into 3 aliquots. Ozone concentrations of 0 µg/mL, 5 µg/mL, 15 µg/mL were evaluated in this study.
Each of these concentrations were added to the previously obtained aliquots in a 1:1 ratio (5ml of diluted semen + 5ml of ozonized air) thus obtaining 3 samples of ozonized semen at the three different concentrations. These samples were stored at a temperature of 4°C inside a polystyrene box as regards the refrigerated ones, while the frozen samples were stored at a temperature of -196°C in tanks of liquid nitrogen. Kinetic parameters such as: total motility, progressive motility, VAP, VSL, VCL, STR, LIN, ALH, BCF and WOB were evaluated by a CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) system after 24 and 48 hours of refrigeration and 5, 15 and 60 minutes after tawing. No significant variations were found in this study regarding treatment with the different ozone concentrations. These results agree with one of the two manuscripts reported in the literature on this subject and disagree with the other one. For this reason, more studies are needed to better understand the effect of the ozone on the extender employed for equine semen conservation.