• gene BRAF
• anticorpi monoclonali
• tumore primitivo
• metastasi
• carcinoma del colon retto
• gene KRas

Tra le neoplasie maligne più diffuse nei Paesi Occidentali il tumore del colon-retto rappresenta la terza causa di morte. Nonostante in Italia ogni anno vengono diagnosticati 20-30 mila nuovi casi è stata registrata una riduzione della mortalità riconducibile ad un’adeguata diagnosi precoce e all’utilizzo di terapie farmacologiche mirate, il cui sviluppo è stato possibile grazie ad una conoscenza più approfondita dei meccanismi biologici che promuovono l’origine e lo sviluppo di tali neoplasie. La percentuale di pazienti che al momento della diagnosi si presenta con malattia metastatica costituisce circa il 50% dei casi e la principale sede di secondarietà è costituita dal fegato e dal polmone.
La strategia terapeutica adoperata nel trattamento del tumore del colon-retto è basata sulla somministrazione di anticorpi monoclonali il cui bersaglio è rappresentato dal recettore del fattore di crescita epidermico (EGFR). Tale recettore regola la cascata di trasduzione del segnale RAS-RAF-MAPKinasi e attraverso l’attivazione di diversi effettori molecolari, tra cui KRas e BRAF, esercita un ruolo di controllo cruciale su alcuni dei più importanti meccanismi coinvolti nello sviluppo e nella progressione delle neoplasie come la crescita, la proliferazione, l’invasione e la migrazione cellulare. Evidenze sperimentali hanno dimostrato che il trattamento con mAb anti-EGFR risulta efficace soltanto nel 10-20% dei casi e la resistenza a tale trattamento è stata associata alla presenza di mutazioni a carico dei geni KRAS e BRAF che causano l’attivazione costitutiva delle proteine da essi codificate, con conseguente induzione della cascata delle MAP-Kinasi indipendente dalla stimolazione del recettore EGFR. La determinazione dello stato mutazionale di tali geni assume quindi un ruolo essenziale nell’identificazione dei pazienti affetti da carcinoma al colon-retto che possono essere trattati con gli anticorpi monoclonali anti-EGFR.
Il mio progetto di tesi si inserisce nel contesto della genotipizzazione, a scopo diagnostico predittivo, di carcinomi del colon-retto svolto nel laboratorio di Anatomia Patologica dell’Azienda Ospedaliera Pisana.
In particolare, lo scopo del mio lavoro è stato quello di verificare se l’analisi mutazionale condotta sul tumore primitivo del colon-retto risulti conforme all’analisi mutazionale effettuata sulla metastasi corrispondente. A tal fine ho effettuato l’analisi mutazionale dei codoni 12, 13 e 61 del gene KRas e del codone 600 del gene BRAF sul tumore primitivo e sulla relativa metastasi.
La genotipizzazione dei codoni in esame è stata condotta con metodologia del pirosequenziamento su DNA estratto da tessuto tumorale fissato in formalina ed incluso in paraffina (FFPE), mediante macrodissezione manuale dell’area tumorale individuata dall’anatomopatologo