• esopolisaccaridi
• funghi filamentosi
• Pseudomonas fluorescens
• microbioma
• Tuber borchii

Tuber borchii è un tartufo che stabilisce importanti associazioni ectomicorriziche con diverse famiglie di piante arboree e, in tutte le fasi del suo ciclo vitale, con un variegato microbiota (batteri, lieviti e funghi filamentosi), presente all’interno del carpoforo e nel suolo circostante. Lo scopo della presente tesi ha riguardato l’isolamento selettivo di batteri riconducibili a Pseudomonas fluorescens e di funghi filamentosi, da campioni di Tuber borchii in tre aree distinte ad elevata vocazione tartufigena (Cecina, San Miniato e Montaione) e loro successiva caratterizzazione molecolare e funzionale. I carpofori di T. borchii e il suolo ad essi associato sono stati utilizzati per l’isolamento selettivo di batteri riconducibili a Pseudomonas fluorescens e di funghi filamentosi. Gli isolati batterici sono stati sottoposti a estrazione del DNA, amplificazione del 16S rDNA, analisi di restrizione con gli enzimi HinfI, AluI e TaqI e successiva identificazione mediante sequenziamento. Infine, gli isolati sono stati caratterizzati da un punto di vista funzionale, allo scopo di valutare la loro capacità di produrre esopolisaccaridi, mediante screening qualitativo su mezzo solido. Dalle colture pure fungine è stato estratto il DNA utilizzato per amplificare la regione ITS al fine identificare, almeno a livello di genere, gli isolati associati ai campioni di tartufo. L’analisi ARDRA ha permesso la separazione dei 120 isolati batterici in otto gruppi, identificati, per la maggioranza (58%), come P. fluorescens e i restanti, come specie affini. Gli isolati P. fluorescens hanno evidenziato la più alta produzione di EPS, composti con importanti ruoli ecologici, tra cui quello di promuovere la simbiosi tra il fungo micorrizico e la pianta. L’identificazione degli isolati fungini ha mostrato la presenza di 15 generi diversi, alcuni presenti nei campioni provenienti da tutte e tre le zone di raccolta come Trichoderma e Penicillium mentre altri, come Clonostachys rosea e Phoma sp., esclusivi di alcune zone. Molti di questi funghi hanno effetti benefici sull’ospite con cui sono associati, attraverso meccanismi di protezione dai patogeni o produzione di metaboliti secondari specializzati.