• Cavallo
• Cryptosporidium parvum
• diagnosi molecolare
• PCR
• prevalenza
• sequenziamento

In questo studio la prevalenza della criptosporidiosi equina in Toscana e in Abruzzo è stata calcolata mediante metodiche biomolecolari, che hanno permesso anche la caratterizzazione della specie coinvolta.
Nel periodo compreso tra Marzo 2007 e Gennaio 2009 sono stati analizzati 647 campioni fecali di cavallo e 4 di asino, provenienti da Toscana (214 cavalli e 4 asini) e Abruzzo (433 cavalli). Gli animali esaminati appartenevano a diverse fasce di età, ad entrambi i sessi e nessuno di questi presentava sintomatologia clinica al momento del prelievo. I campioni raccolti sono stati conservati a 4°C ed esaminati entro 3 giorni dal prelievo. Ogni singolo campione è stato concentrato con soluzione di saccarosio e da 200 l di sospensione è stato estratto il DNA mediante kit commerciale. Mediante semi-nested PCR ( in 2 step con primers degenerati) (Traversa et al, 2008, Mol Cell Probes 22: 122-128) è stato amplificato un frammento di circa 400bp del gene che codifica per la proteina di parete delle oocisti di Cryptosporidium (COWP).
Tutti gli amplificati sono stati purificati utilizzando colonne Ultrafree-DA (Millipore, Billerica, MA) e sottoposti a sequenziamento utilizzando kit Taq DyeDeoxyTerminator cycle in sequenziatore ABI-PRISM 377 . L’esattezza delle sequenze è stata confermata dal sequenziamento diretto bi-direzionale. Gli elettroferogrammi sono stati verificati manualmente, allineate e confrontate con quelle registrate in GenBankTM usando il programma Nucleotide-Nucleotide “Basic Local Alignment Search Tool” (BLAST) (Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 3384-3402). I dati ottenuti sono stati statisticamente analizzati mediante test del χ2
E’ stata riscontrata una prevalenza sul totale dei campioni pari al 2,61% (17/651). La prevalenza in Toscana risulta pari al 3,67% (8/218), mentre in Abruzzo è del 2,07% (9/433). Tutti i campioni positivi appartengono a cavalli adulti con età compresa tra i 3 e i 19 anni. La prevalenza più elevata (70,6%) è stata riscontrata tra cavalli di età ≥ ai 7 anni. Per quanto riguarda il sesso degli animali, le prevalenze riscontrate sono le seguenti: 47,06%(8/17) nelle femmine, 41,2% (7/17) nei castroni e 11,74% (2/17) nei maschi. La distribuzione della prevalenza di Cryptosporidium è statisticamente dipendente dall’allevamento. C.parvum è risultata la specie responsabile dell’infezione in tutti gli animali positivi.