• antibiotic resistance
• group B Streptococcus
• resistenza ad antibiotici
• serotyping
• sierotipizzazione
• Streptococco di gruppo B

Streptococcus agalactiae, o Streptococco di gruppo B (Group B Streptococcus, GBS) è un importante patogeno umano, conosciuto come principale causa di sepsi e meningite neonatale, ma è anche responsabile di malattia invasiva nelle donne in gravidanza e negli adulti. Ampiamente studiato nei neonati, GBS causa una sindrome precoce nei primi giorni di vita, definita early onset disease, quando il batterio è acquisito durante il parto dalla madre colonizzata, o una sindrome che si manifesta tra 7 e 90 giorni dopo la nascita, late onset disease. Nelle gestanti, GBS può causare malattia, o colonizzare in modo asintomatico il tratto urogenitale. Negli ultimi anni GBS è emerso come patogeno negli anziani, causando malattia invasiva che si manifesta con batteremia e infezioni della pelle e dei tessuti molli. L’incidenza della malattia da GBS nei neonati, ridotta con l’introduzione di una profilassi antibiotica, attualmente è di 0,53 su 1000 nati vivi in Europa, 0,67 in America e 0,15 in Australasia. Nelle donne in gravidanza l’incidenza di malattia da GBS è di 0,49/1000, ma si stima una colonizzazione del 20-30%. Negli adulti l’incidenza di malattia da GBS, che risulta in aumento, è di 7,3/100 000 nella fascia d’età 15-64 anni, e 26,0/100 000 oltre i 65 anni.
Streptococcus agalactiae è un batterio β-emolitico secondo la classificazione di Brown ed è uno Streptococco di gruppo B nella classificazione di Lancefield. GBS può essere classificato sulla base del polisaccaride capsulare, che definisce dieci sierotipi (Ia, Ib, II-IX); può inoltre essere caratterizzato con un sequence type (ST) in base alla sequenza di sette geni house-keeping identificata con la tecnica del Multilocus Sequence Typing (MLST).
Lo scopo della tesi è di caratterizzare la distribuzione di GBS nelle donne in post-menopausa colonizzate nel tratto urogenitale, nell’area geografica di Granada, Spagna. Il progetto include: 1) lo studio della suscettibilità e della resistenza agli antibiotici Penicillina, Eritromicina e Clindamicina; 2) l’analisi della distribuzione dei sierotipi utilizzando due tecniche, l’agglutinazione Strep-B-Latex e Multiplex PCR; 3) l’identificazione e la distribuzione degli ST grazie alla tecnica MLST.
Il tasso di colonizzazione delle donne in menopausa è risultato del 17,8%. I ceppi di GBS isolati da 50 donne colonizzate dal batterio hanno mostrato una sensibilità del 100% alla penicillina. Il tasso di resistenza all’eritromicina è del 26%, mentre il 22% è risultato resistente alla clindamicina. L’analisi del sierotipo capsulare ha mostrato una frequenza maggiore dei sierotipi III (34%), Ia (22%), V (20% e II (14%), mentre gli altri sierotipi sono rilevabili in percentuali meno significative. Con l’MLST sono stati identificati gli ST più frequenti: ST-19, ST-23 e ST-17. È inoltre osservabile una importante correlazione tra sierotipo Ia e ST-23 (16%), sierotipo III e ST-19 (14%), sierotipo III e ST-17 (12%), sierotipo V e ST-1 (12%). La distribuzione del GBS nelle donne in menopausa è risultato simile a quella riscontrabile nei neonati, nelle donne gestanti e negli adulti, con delle divergenze secondarie nei sierotipo e ST. La progressiva diffusione del sierotipo V negli anziani, riportata in letteratura, non è rilevabile nella popolazione oggetto del nostro studio. Considerando la mancanza di informazioni sulla distribuzione di GBS negli anziani, i dati ottenuti con questo studio contribuiscono ad ampliare le conoscenze epidemiologiche sul patogeno, permettendo di capire in modo più approfondito e completo il batterio e le sue caratteristiche. I nostri dati potranno essere comparati con quelli di altre sottogruppi nelle fasce di età avanzate, per capire perché GBS si sta diffondendo in questa popolazione, e se la colonizzazione con un dato ceppo può rappresentare un fattore di rischio per l’evolversi della malattia, permettendoci così di intervenire con misure profilattiche appropriate.


ABSTRACT

Streptococcus agalactiae, also known as Group B Streptococcus (GBS) is an important human pathogen mainly known as a leading cause of neonatal sepsis and meningitis, but is also responsible for invasive disease in pregnant women and adults. From extensive studies in newborns it is known that GBS can cause early-onset disease in the first days of life when it is acquired from colonized mothers during birth, or late-onset disease, between 7 and 90 days after birth. In pregnant women GBS can cause invasive disease or colonize asymptomatically the urogenital tract. More recently, GBS has emerged as an important pathogen for elderly adults, where it causes primary bacteremia without evident focus, and skin or soft tissue infection. Overall estimated GBS incidence in neonates, which decreased after intrapartum antibiotic prophylaxis was introduced, is now 0.53 per 1000 live births in Europe, 0.67 in the Americas and 0.15 in Australasia. In pregnant women GBS disease incidence is 0.49/1000, while estimated colonization is 20-30%. In non-pregnant adults invasive GBS incidence is heavily increasing, being 7.3/100 000 in people aged 15-64, and 26.0/100 000 among those 65 years or older.
Streptococcus agalactiae is a β-hemolytic bacteria according to Brown’s classification and is a group B Streptococcus in the Lancefield classification. GBS can be classified on the basis of the capsular polysaccharide (CPS), which defines ten serotypes (Ia, Ib, II-IX). GBS can furthermore be characterized by a Sequence Type, based on the sequence of seven housekeeping genes, revealed with Multilocus Sequence Typing (MLST).
The aim of the thesis is to characterize GBS distribution in colonized post-menopausal women in Granada, Spain. While the epidemiology of GBS is well studied in neonatal disease, there are few data on the elderly. The project included: 1) study of susceptibility and resistance to Penicillin, Erythromycin and Clindamycin; 2) serotype distribution analysis with Strep-B-Latex agglutination test and Multiplex PCR; 3) Sequence Type identification and distribution through Multilocus Sequence Typing.
Colonization rate in post-menopausal women was 17.8%. GBS strains isolated from 50 colonized subjects were 100% susceptibility to penicillin. Erythromycin resistance rate was 26 %, and clindamycin resistance rate was 22%. Analysis of the capsular serotype showed that the most frequent serotypes were III (34 %), Ia (22 %), V (20 %) and II (14 %), while other serotypes were present in less significant percentages.
MLST showed that the most frequent ST was ST-19, followed by ST-23, ST-1 and ST-17. Remarkable correlation were observed between serotype Ia and ST-23 (16%), followed by serotype III ST-19 (14%), serotype III ST-17 (12%) and serotype V ST-1 (12%).
Group B Streptococcus distribution in post-menopausal women was similar to infants, pregnant women and adults, with some minor divergence in terms of serotypes and sequence types. The emergence in serotype V as the major capsular serotype in the elderly, reported in the literature, was not observed in our population. Due to the lack of information on GBS in the elderly, with our data we contribute to the scientific background on the epidemiology of this pathogen, thus allowing to better understand the bacteria and its features. Our data will represent a basis for comparison to data on other subgroups of elderly adults, to understand why GBS invasive disease is spreading in this population, and if colonization with a certain strain might be a risk factor for pathology development, therefore allowing us to intervene with appropriate prophylaxis measures.