• Real-Time quantitative PCR
• microRNA
• Trapianto di Organo Solido

I microRNA (miRNA) sono delle piccole molecole endogene di RNA non codificante, a singolo filamento, della lunghezza di 19-22 bp, filogeneticamente conservate ed espresse in un numero elevato di organismi, incluso l'uomo.
Fanno parte di una grande famiglia di geni regolatori, e sono coinvolti in numerosi processi biologici, come la differenziazione e la proliferazione cellulare, la carcinogenesi e il danno cellulare. Recenti studi hanno messo in evidenza un coinvolgimento diretto di queste molecole nei processi di regolazione dell'ematopoiesi, dell'infiammazione e della risposta immune (innata ed adattativa).
I miRNA sono molecole notevolmente stabili, presenti in quantità elevata, e possono essere analizzati anche in tessuti fissati in formalina. La loro presenza nei diversi liquidi biologici come sangue, urina, saliva, siero e plasma li rende degli ottimi biomarkers per il monitoraggio dello stato di salute "dell'allograft" e più in generale dello stato immunologico del paziente sottoposto a trapianto di organo.
Sulla base di quanto riportato in letteratura nell'ambito dei meccanismi di regolazione del sistema immune, lo scopo della tesi è stato quello di mettere a punto una metodica per la determinazione dell'espressione dei seguenti miRNA: miR-142-3p e miR-223-3p. Queste molecole potrebbero essere utili biomarkers sia per il monitoraggio dei pazienti sottoposti a trapianto sia per la standardizzazione e personalizzazione della terapia immunosoppressiva.
La valutazione dell'espressione dei microRNA è stata effettuata utilizzando la tecnica della Real-Time quantitativa PCR (qRT-PCR). Essa è considerata, dal punto di vista tecnico, il "gold standard" per l'analisi quantitativa dei miRNA in quanto molto sensibile ed accurata. La metodica è stata validata utilizzando una popolazione di controllo (PC) e Pazienti sottoposti a Trapianto di Organo Solido (TOS). L’ analisi preliminare dei dati ha messo in evidenza un differente profilo di espressione dei miRNA fra queste due popolazioni.