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Tesi etd-02222012-163155


Thesis type
Tesi di dottorato di ricerca
Author
CUCCU, BARBARA
URN
etd-02222012-163155
Title
Ruolo immunologico della proteina PPE44 di Mycobacterium tuberculosis nell'infezione tubercolare umana
Settore scientifico disciplinare
MED/07
Corso di studi
MICROBIOLOGIA E GENETICA
Commissione
tutor Dott.ssa Rindi, Laura
Parole chiave
  • proteine PPE
  • PPE proteins
  • M.tuberculosis
Data inizio appello
15/03/2012;
Consultabilità
completa
Riassunto analitico
La tubercolosi (TB) rappresenta oggi la più importante infezione batterica umana a livello mondiale. Ad oggi, le principali strategie per il controllo della TB prevedono lo sviluppo di un nuovo vaccino, più efficace e sicuro di quello attualmente disponibile, e l’allestimento di un test immunologico efficace per la diagnosi di infezione tubercolare.<br>Recentemente il nostro gruppo ha identificato un nuovo antigene di Mycobacterium tuberculosis, la proteina PPE44, membro della famiglia delle &#34;proteine PPE&#34;. Sebbene il ruolo di PPE44 nell&#39;infezione tubercolare non sia noto, è stato dimostrato che topi infettati con M. tuberculosis presentano una risposta immune verso PPE44 e che l&#39;immunizzazione di topi con vaccini a subunità esprimenti PPE44 conferisce un&#39;immunità protettiva verso M. tuberculosis paragonabile a quella indotta da BCG. <br>La ricerca svolta ha avuto lo scopo di estendere lo studio della risposta immune verso PPE44 nell&#39;infezione tubercolare umana valutando la frequenza di linfociti T secernenti IFN-γ mediante ELISpot e citometria a flusso in soggetti con infezione latente o TB in atto ed in controlli sani. E&#39; stata così dimostrata una risposta immune IFN-γ+ verso PPE44 in un&#39;altissima proporzione di individui con infezione tubercolare latente ed, in minor misura, in soggetti vaccinati con BCG. Inoltre, mediante l&#39;impiego di peptidi sintetici di 20 aminoacidi, sovrapposti di 10, che ricoprono l&#39;intera sequenza di PPE44, è stato identificato un epitopo T immunodominante CD4+/IFN-γ+, rappresentato dal peptide denominato p1L (VDFGALPPEVNSARMYGGAG), nella regione NH2-terminale della molecola PPE44 alla posizione aminoacidica 1-20. Al contrario, non è stata dimostrata una risposta T CD4+/IFN-γ+ verso PPE44 o verso l&#39;epitopo p1L nella maggior parte (7 su 8) dei pazienti con TB attiva. I dati ottenuti suggeriscono un ruolo immunologico di PPE44 e del suo epitopo p1L che potrebbe essere importante per l&#39;immunità protettiva e per la diagnosi immunologica dell&#39;infezione tubercolare latente.<br>Nella seconda parte del lavoro di tesi è stato approfondito il ruolo immunologico della proteina PPE44 nell&#39;infezione tubercolare umana mediante lo studio della sua interazione con le cellule dendritiche (DC), cellule che svolgono un ruolo fondamentale nel dirigere la risposta immune anti-tubercolare verso un fenotipo protettivo o patologico. In particolare, è stato effettuato uno studio fenotipico e funzionale dell’interazione tra PPE44 e DC umane valutando, mediante citofluorimetria, la presenza di marcatori di maturazione sulla superficie delle DC coltivate in presenza di rPPE44 o del dominio proteico rPPE44160-382. I risultati ottenuti suggeriscono l’assenza di interazione tra PPE44 e DC, dal momento che la proteina completa ricombinante rPPE44 o il suo dominio C-terminale di 222 aminoacidi PPE44160-382 non si sono dimostrati in grado né di indurre né di inibire la maturazione delle DC.<br>In conclusione, i dati complessivamente ottenuti nella presente tesi di dottorato in modelli umani ex-vivo, hanno messo in luce l’importanza immunologica della proteina PPE44 e del suo peptide immunodominante p1L suggerendo un loro potenziale impiego quali antigeni protettivi in un vaccino a subunità, nonché per lo sviluppo di nuovi sistemi diagnostici volti alla determinazione dell’infezione tubercolare latente. <br>
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