• eLOD50
• matrici alimentari
• implementazione
• metodi alternativi
• ISO 16140-3:2021
• metodi di riferimento

La ISO 16140-3:2021 descrive i protocolli che i singoli laboratori utilizzatori devono seguire per procedere alla verifica di metodi di riferimento e metodi alternativi validati in microbiologia alimentare. In particolare per i metodi qualitativi (presenza/assenza) è prevista la determinazione del LOD50 stimato (eLOD50 ) sia per la verifica di implementazione che per la verifica delle matrici alimentari, in base al campo di applicazione del laboratorio. In questo lavoro di tesi, condotto presso il laboratorio di Sicurezza alimentare dell’Istituto zooprofilattico sperimentale di Pisa, sono descritte le verifiche su matrici alimentari per 5 metodi di riferimento colturali (ricerca di Salmonella spp, Listeria monocytogenes, Campylobacter spp, Yersinia enterocolitica e Vibrio vulnificus) e 4 metodi alternativi proprietari validati (kit iQCheck, Biorad) in Real-Time PCR. È stato calcolato l’eLOD50 utilizzando quattro matrici problematiche: parmigiano, mortadella a fette, carne bovina, gamberetti cotti. Al termine delle prove i risultati ottenuti sono stati confrontati con i valori di LOD50 presenti nei documenti di validazione delle norme o, in loro assenza, con il valore di 1 ufc/porzione di prova.I valori di eLOD50 ottenuti risultano conformi ai criteri di accettazione per tutte le prove, ad eccezione di quella per Listeria monocytogenes Real-Time PCR per cui il laboratorio ha previsto una ripetizione dopo aver analizzato le cause della mancata aderenza al valore di eLOD richiesto.

ISO 16140-3:2021 describes the protocols to be followed by individual user laboratories to proceed with the verification of validated reference and alternative methods in food microbiology. Specifically for qualitative methods (presence/absence), the determination of estimated LOD50 (eLOD50 ) is required for both implementation and food matrix verification, depending on the scope of the laboratory. In this thesis work, conducted at the Food Safety Laboratory of the Experimental Zooprophylactic Institute of Pisa, verifications on food matrices for 5 cultured reference methods (detection of Salmonella spp, Listeria monocytogenes, Campylobacter spp, Yersinia enterocolitica, and Vibrio vulnificus) and 4 validated proprietary alternative methods (iQCheck kit, Biorad) in Real-Time PCR are described. The eLOD50 was calculated using four problem matrices: parmesan cheese, sliced mortadella, beef, and cooked shrimp. At the end of the tests, the results obtained were compared with the LOD50 values found in the standards validation documents or, in their absence, with the value of 1 cfu/evidence portion.The eLOD50 values obtained were found to comply with the acceptance criteria for all the tests, except for the one for Listeria monocytogenes Real-Time PCR for which the laboratory scheduled a repeat after analyzing the causes of non-adherence to the required eLOD value.