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Tesi etd-10052007-140140


Tipo di tesi
Tesi di laurea specialistica
Autore
ASSENZA, FABRIZIO
URN
etd-10052007-140140
Titolo
DNA-FISH in cromosomi metafasici di Bos taurus su una sottosequenza della sequenza ripetuta S4 (DDBJ: D16357)
Struttura
MEDICINA VETERINARIA
Corso di studi
MEDICINA VETERINARIA
Commissione
Relatore Podestà, Adriano
Relatore Montagnoli, Giorgio
Relatore Martelli, Franco
Parole chiave
  • Bos taurus
  • Cromosoma Y
  • Sorting del seme
  • DNA-F.I.S.H.
  • PNAs
Data inizio appello
26/10/2007;
Disponibilità
parziale
Data di rilascio
2047-10-26
Riassunto analitico
Questo esperimento dimostra la specificità della sonda fluorescente “Y-NOT” per il cromosoma Y di Bos Taurus tramite Fluorescent In Stu Hybridization (F.I.S.H.). Le preparazioni citogenetiche sono state ottenute secondo i protocolli standard, da linfociti di bovino maschio coltivati a partire da sangue intero. La sonda è stata progettata sulla regione compresa tra la base 141 e 191 della sequenza ripetuta S4 (1542 bp, Kageyama et Al. 2004), dove si trovano 50 ripetizioni consecutive della coppia gt. La sequenza nucleotidica di “Y-NOT” è 5’-cacacacacacacacacacaca-3’ e la sua estremità 5' è marcata con FITC. Le dimensioni della sonda sono state ideate utilizzando l’implementazione dell’ algoritmo B.L.A.S.T. estendendo la ricerca della sottosequenza rappresentata da “Y-NOT” sul genoma di Bos taurus.. La sonda è stata ottenuta in single-strand e liofilizzata da fonte commerciale. Il segnale di ibridazione si localizza unicamente sul cromosoma Y, dimostrando che le dimensioni della sonda sono idonee a ottenere un segnale analitico intenso, mantenendo la specificità di marcatura della sequenza 5’-gtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt-3’ per il cromosoma Y bovino. Il risultato sperimentale ha dato il via allo sviluppo di un approccio originale al sex sorting del seme bovino, basato sull’utilizzo di acidi nucleici peptidici (PNA).
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