ETD

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• sviluppo
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La neurogenesi è l’evento attraverso il quale si generano neuroni maturi e funzionali a partire da precursori neurali. Inizialmente si pensava che questo processo, nei vertebrati, si verificasse unicamente durante lo sviluppo embrionale e peri-natale. Solo negli ultimi anni si è dimostrato che la neurogenesi avviene anche nei cervelli adulti. Lavori preliminari indicano che la proteina zinc finger znf367 possa avere un ruolo nei processi di proliferazione e differenziamento dei progenitori neurali. Questi studi si sono però basati su tecniche di guadagno o perdita di funzione del gene solamente in maniera transiente a livello embrionale. Per poter studiare il ruolo di znf367 anche nella neurogenesi adulta, si è quindi deciso di creare una linea mutante di zebrafish (Danio rerio) che avesse entrambe le copie di znf367 inattivate mediante la tecnica del CRISPR/Cas9. Lo scopo di questo lavoro è quello di valutare le differenze morfologiche e molecolari tra embrioni di zebrafish mutanti e non, a diversi stadi di sviluppo, in modo tale da poter validare i risultati ottenuti con le iniezioni transienti. In particolare sono state effettuate sia analisi qualitative, attraverso protocolli di ibridazione “in situ” e di immunofluorescenza; sia analisi quantitative tramite esperimenti di PCR quantitativa. Infine, si sono analizzati cervelli di individui adulti wild type e mutanti per znf367, tramite tecniche di marcatura su sezione.