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HMGA2 è una proteina nucleare non istonica appartenente alla famiglia HMGA; al pari degli altri membri di tale famiglia è caratterizzata da dimensioni contenute (minori di 30 kDa), da una elevata mobilità elettroforetica in gel di poliacrilammide e dalla capacità di intervenire indirettamente nella regolazione della trascrizione genica.
Le sue caratteristiche funzionali sono legate sia alla capacità di interagire con il DNA grazie alla presenza di tre domini caratteristici della famiglia HMGA, noti come AT-Hooks, in grado di riconoscere e legare regioni ricche di AT nel solco minore della doppia elica del DNA, che di modulare l’attività di substrati proteici attraverso specifiche interazioni con essi.
Nel nostro laboratorio è stato clonato e sequenziato l’omologo di hmga2 di Xenopus laevis; successivamente ne è stata caratterizzata l’espressione spazio-temporale nell’embriogenesi di Xenopus laevis e infine ne è stato analizzato il ruolo funzionale mediante esperimenti di perdita di funzione attraverso l’iniezione di oligonucleotide antisenso morpholino.
Il mio lavoro di tesi è stato quello di confermare i risultati dei saggi preliminari di perdita di funzione, verificando la specificità degli effetti sullo sviluppo degli embrioni di Xenopus laevis in seguito al knock-down di hmga2. Per raggiungere questo obiettivo ho iniettato un oligonucleotide antisenso morpholino, diverso da quello usato nei precedenti esperimenti.
Il morpholino è stato iniettato insieme all’mRNA dei geni reporter LacZ e GFP nella porzione animale di uno dei blastomeri dorsali di embrioni allo stadio di quattro cellule. Sugli embrioni, a diversi stadi di sviluppo, sono state effettuate ibridazioni in situ whole mount con sonde specifiche di marcatori dello sviluppo e differenziamento delle creste neurali.
Questi esperimenti hanno permesso di dimostrare la validità dei risultati ottenuti con i saggi preliminari e di rafforzare l’ipotesi di un possibile coinvolgimento di hmga2 nei processi molecolari che avvengono nelle cellule della cresta neurale durante lo sviluppo embrionale di Xenopus laevis.