• nitrosotioli
• metodo analitico
• GSNO

In questo lavoro di Tesi è stato messo a punto un nuovo metodo analitico per la determinazione selettiva di Nitrosoglutatione (GSNO) e altri Nitrosotioli (RSNO) nel plasma e nei campioni reali. Il metodo si basa sull'uso della cromatografia liquida (LC) accoppiata alla decomposizione enzimatica post colonna del GSNO ad opera della γ-gluatamiltransferasi (GGT) seguita dalla decomposizione del suo prodotto S-nitrosocisteinilglicina (CGNO) ad opera del Cu(II). Nella spira di reazione la GGT idrolizza il gruppo γ-glutamile del GSNO andando a formare CGNO. Il prodotto della reazione è decomposto nella stessa miscela di reazione ad opera del Cu(II) a una velocità 103- 104 maggiore rispetto al GSNO, e forma quantitativamente Cisteinilglicina ossidata e NO. L'NO ottenuto reagisce con la 4-5 Diaminofluoresceina (DAF-2) e il triazolo ottenuto viene rilevato (λex=485nm λem=515nm). Il limite di quantificazione (LOQc) del GSNO per il metodo proposto è risultato essere 5 nM, con una precisione (CV) del 3,5% per GSNO 300 nM e un range dinamico lineare tra 5 e 3000 nM con concentrazione di DAF-2 di 0,3μM nella spira di reazione.
Questo metodo ci ha permesso di individuare e determinare anche altri Nitrosotioli (CysNO, HCysNO, CGNO). Questi Nitrosotioli sono stati separati cromatograficamente e determinati fluorimetricamente dopo decomposizione post colonna mediata da Cu(II).. Inoltre, il sistema cromatografia liquida accoppiata a rilevazione fluorimetrica (LC-FD) ci ha permesso di separare quei composti che nel plasma interferiscono con la rilevazione dell'NO.
Nelle condizioni ottimizzate il metodo LC-FD è stato usato per la determinazione del GSNO e degli altri Nitrosotioli nel plasma umano.