• P19CL6
• cardiogenesi
• TBX5
• microRNA

I microRNA (miRNA) sono brevi molecole di RNA a singolo filamento che regolano l’espressione genica a livello post-trascrizionale. Il progetto in cui si inserisce la tesi ha come scopo l’identificazione di miRNA cardiaci regolati dal fattore di trascrizione T-box transcription factor 5 (TBX5), che svolge un ruolo fondamentale nello sviluppo del cuore e degli arti superiori nei vertebrati. Mediante un primo screening bioinformatico ed esperimenti preliminari in zebrafish, è stato individuato il miRNA-218. La tesi ha come scopo l’utilizzo di un sistema di cardiogenesi in vitro per la validazione della correlazione tra il miRNA e TBX5, e l’estensione dell’analisi per l’identificazione di ulteriori miRNA cardiaci. Il sistema utilizzato sono le P19CL6, cellule di carcinoma embrionale murino che differenziano in cardiomiociti. Per prima cosa è stato ottimizzato il protocollo di differenziamento cardiaco, quindi, tramite qRT-PCR, è stata valutata la colinearità tra l’espressione di TBX5 e del miRNA-218 nel differenziamento, e in esperimenti di perdita e di guadagno di funzione di TBX5. Il sistema è stato utilizzato per validare ulteriori microRNA cardiaci emersi da deep sequencing in zebrafish knock-out per TBX5. Infine, il pathway di interazione da noi proposto è stato parzialmente validato mediante l’analisi di un target del miRNA-218. I dati in nostro possesso evidenziano l’esistenza di una correlazione tra il miRNA-218 e TBX5, chiarendo parte del pathway che regola la cardiogenesi.