• catene leggere libere
• calibratori
• nefelometria

Le catene leggere libere costituiscono, fin dalla loro scoperta, oggetto di grande interesse scientifico. La loro determinazione quantitativa, che ha ormai assunto un ruolo consolidato nella diagnosi, nella prognosi e nel monitoraggio di diverse discrasie plasmacellulari, sembra coinvolgere nuovi ambiti clinici come le malattie autoimmunitarie, quelle degenerative del sistema nervoso centrale e le allergopatie (Basile U et Mussap M, 2013).
Per il dosaggio delle catene leggere libere in campioni di siero o plasma sono attualmente disponibili due reagenti, The Binding Site Freelite e Siemens N Latex FLC. Il primo impiega un metodo immunoturbidimetrico o nefelometrico amplificato al lattice utilizzando anticorpi policlonali di pecora tollerizzata; il secondo si serve di un metodo immunonefelometrico amplificato al lattice utilizzando una miscela di anticorpi monoclonali murini. Purtroppo, la mancanza di armonizzazione tra i risultati ottenuti con questi due metodi commerciali non consente di trasferire le conoscenze acquisite con l’impiego del primo reattivo a quelle ottenute con il secondo (Caponi L et al, 2016; Mollee P et al, 2013; Dolci A et Vernocchi A, 2012).
Al fine di comprendere meglio la capacità di legame dei due reattivi, è stato deciso di caratterizzare i calibratori impiegati nei reattivi Freelite Human Kappa e Freelite Human Lambda (The Binding Site) per il contenuto di catene leggere libere di tipo kappa e di tipo lambda. Questi sono stati sottoposti ad analisi di Western Blotting dopo separazione elettroforetica in SDS-PAGE eseguita in condizioni non riducenti e le catene leggere sono state evidenziate impiegando anticorpi primari diretti contro le catene leggere kappa e lambda totali. Sui calibratori è stata quindi eseguita una cromatografia ad esclusione molecolare, e sulle frazioni ottenute sono state dosate le catene leggere libere kappa e lambda con i reattivi Freelite Human Kappa e Freelite Human Lambda (The Binding Site) in nefelometria prima e dopo l’aggiunta del DTT (Ditiotreitolo), un agente riducente i ponti disolfuro. I risultati ottenuti sono stati confermati da analisi di Western Blotting e suggeriscono la presenza di catene leggere a più alto peso molecolare, che rappresentano verosimilmente forme di aggregazione quali dimeri, trimeri o oligomeri di ordine superiore che scompaiono per dar luogo a forme a più basso peso molecolare dopo trattamento con DTT. I ponti disolfuro intercatena potrebbero quindi influenzare la reattività degli antiseri utilizzati.