• VLPs
• ssDNA
• Geni Helper
• Adenovirus
• Packaging
• Lievito
• AAV
• Terapia genica

Il lavoro ha come obiettivo l'ottimizzazione dell'utilizzo di S.cerevisiae come cellula di packaging per produrre virus adeno associati (AAV). Infatti l'utilizzo del lievito permetterebbe uno scale up economico e semplice per la produzione di AAV ad alto titolo, condizione fondamentale per i trials clinici in terapia genica, in cui il virus viene utilizzato. Per questo è stata testata la produzione di virus like particles (VLPs) e la qualità del DNA a singolo filamento (ssDNA) incapsidato, confrontando due condizioni: una in cui il lievito veniva trasformato con il gene Rep68 codificante per le Replicasi 68 e 40 d AAV, e l'altra trasformandolo con il gene Rep78 codificane per le Replicasi 78 e 52 di AAV. In entrambi i casi i ceppi erano stati trasformati con il plasmide (pRep68+VP o pRep78+VP) contenente il gene Rep e i geni VP1, 2 e 3 codificanti per le 3 proteine capsidiche, e con un plasmide (pAAV-GFP-URA) con due geni marker fiancheggiati dalle ITR, segnale per la replicazione del ssDNA e per il suo incapsidamento. Inoltre uno scopo del lavoro, per aumentare l'efficienza di produzione di VLPs in lievito, era creare un sistema che permettesse di cotrasformare nel ceppo con pRep68/78+VP e pAAV-GFP-URA, i geni helper Adenovirali E1A, E1B, DBP, E4orf6, VA RNA, per valutare se la funzione di helper migliorasse la quantità e qualità della produzione virale. Parallelamente, è stata anche analizzata l'espressione dei geni Adenovirali in S. cerevisiae.