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Archivio digitale delle tesi discusse presso l'Università di Pisa

Tesi etd-03102017-151203


Tipo di tesi
Tesi di laurea magistrale
Autore
DE SARLO, MIRIAM
URN
etd-03102017-151203
Titolo
Studio funzionale del proto-oncogene lin28b durante lo sviluppo delle cellule della cresta neurale in embrioni di Xenopus laevis
Dipartimento
BIOLOGIA
Corso di studi
BIOLOGIA MOLECOLARE E CELLULARE
Relatori
relatore Prof.ssa Ori, Michela
Parole chiave
  • lin28b
  • cresta neurale del tronco
  • neuroblastoma
Data inizio appello
06/04/2017
Consultabilità
Completa
Riassunto
Il neuroblastoma è un tumore neuroendocrino ed è uno dei più comuni tumori maligni pediatrici. La sua incidenza, infatti, è di 10,2 casi per milione di bambini ed è spesso diagnosticato durante il primo anno di età. Esso è un tumore solido che si sviluppa nel sistema nervoso periferico simpatico. Evidenze sperimentali suggeriscono che un alterato differenziamento e/o un’alterata migrazione delle cellule della cresta neurale (NCC) del tronco, precursori delle cellule cromaffini del surrene e dei neuroni simpatici, possa essere causa della malattia.
Ad oggi non è ancora chiaro quali siano i fattori che causano e influenzano lo sviluppo del neuroblastoma, ed è proprio a questo scopo che è nata una collaborazione tra il nostro gruppo di ricerca e quello del Laboratorio Neuroblastoma dell’Istituto pediatrico “Città della speranza” di Padova guidato dal Prof. Gian Paolo Tonini. Il gruppo di ricerca del Prof. Tonini, combinando analisi trascrittomiche e dati presenti in database pubblici, ha stilato una lista di nuovi geni potenzialmente coinvolti nella formazione del neuroblastoma. Il mio progetto di tesi si propone di verificare e indagare in vivo il ruolo svolto da uno dei suddetti geni: lin28b. Quest’ultimo codifica per una proteina che lega mRNA. Lo scopo della mia tesi è stato quello di studiare la funzione del gene lin28b in vivo durante lo sviluppo e la migrazione delle NCC del tronco utilizzando come modello animale Xenopus laevis. Ho quindi caratterizzato, tramite ibridazione in situ “whole mount” e su sezione, il“pattern” d’espressione di lin28b durante l’embriogenesi, non ancora descritto in letteratura, per verificarne l’espressione nelle NCC del tronco. Ho condotto esperimenti di sovraespressione genica mediante la microiniezione del RNA messaggero di lin28b. Gli embrioni microiniettati sono stati processati tramite ibridazione in situ “whole mount” utilizzando specifici marcatori con lo scopo di valutare i possibili effetti che lin28b ha sullo sviluppo di questa popolazione di cellule.
Inoltre, dati preliminari ottenuti dal trattamento di una linea in coltura di cellule di neuroblastoma con un inibitore competitivo di recettori chinasici chiamato TP0903 hanno evidenziato una regolazione negativa dell’espressione di lin28b. TP0903 è in grado di bloccare la transizione epitelio-mesenchimatica e la migrazione delle NCC. Ho svolto esperimenti di trattamento farmacologico e di successiva analisi qualitativa e quantitativa su embrioni “wild type” di Xenopus laevis al fine di confermare l’effetto di TP0903 anche in vivo, evidenziare possibili effetti tossici del farmaco e valutare se ci fosse una alterazione nell’espressione genica di lin28b.
I risultati finora ottenuti suggeriscono che lin28b possa essere implicato nello sviluppo delle NCC del tronco e che la sua sovraespressione possa interferire con la migrazione e il differenziamento di questa popolazione cellulare. I risultati ottenuti dal trattamento farmacologico mostrano che TP0903 è in grado di alterare la migrazione delle NCC del tronco e che non è tossico per gli embrioni, ma non sembra influenzare negativamente l’espressione di lin28b.
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